Κιτ απομόνωσης ολικού RNA Κιτ ολικής απομόνωσης RNA από κύτταρο
Περιγραφή κιτ:
Εξαιρετικά καθαρισμένο και υψηλής ποιότητας ολικό RNA μπορεί να ληφθεί από διάφορα καλλιεργημένα κύτταρα σε 11 λεπτά.
Χωρίς RNase
Λειτουργεί σε θερμοκρασία δωματίου (15-25℃)
Με Στήλη Καθαρισμού DNA
Υψηλή απόδοση RNA
Γρήγορα: Ολοκληρώστε την εξαγωγή σε 11 λεπτά
Ασφάλεια: Κανένα Οργανικό χημικό
Περιγραφή
Αυτό το κιτ χρησιμοποιεί τη στήλη περιστροφής και τον τύπο που αναπτύχθηκε από την Foregene, η οποία μπορεί να εξάγει αποτελεσματικά ολικό RNA υψηλής καθαρότητας και υψηλής ποιότητας από κύτταρα που καλλιεργήθηκαν σε πλάκες 96, 24, 12 και 6 φρεατίων.
Το κιτ παρέχει μια αποτελεσματική στήλη καθαρισμού DNA, η οποία μπορεί εύκολα να διαχωρίσει το υπερκείμενο και το κυτταρόλυμα, να δεσμεύσει και να αφαιρέσει το γονιδιωματικό DNA.Η λειτουργία είναι απλή και εξοικονομεί χρόνο.
TΗ στήλη μόνο για RNA μπορεί να συνδέσει αποτελεσματικά το RNA με έναν μοναδικό τύπο.Ένας μεγάλος αριθμός δειγμάτων μπορεί να υποβληθεί σε επεξεργασία ταυτόχρονα.
Εξαρτήματα κιτ
| Σύνθεση κιτ | RE-03111 | RE-03114 |
| 50 Τ | 200 Τ | |
| Προσωρινή μνήμη cRL1* | 25 mL | 100 mL |
| Ρυθμιστικό διάλυμα cRL2 | 15 mL | 60 mL |
| Buffer RW1* | 25 mL | 100 mL |
| Buffer RW2 | 24 mL | 96 mL |
| Χωρίς RNase ddH2O | 10 mL | 40 mL |
| RNA-Μόνο Στήλη | 50 | 200 |
| Στήλη Καθαρισμού DNA | 50 | 200 |
| Εντολή | 1 | 1 |
*Παρακαλούμε να φοράτε γάντια και να λαμβάνετε προστατευτικά μέτρα κατά τη λειτουργία καθώς το Buffer cRL1 και το Buffer RW1 περιέχουν ερεθιστικά χαοτροπικά άλατα.
Χαρακτηριστικά & πλεονεκτήματα
■ Η όλη διαδικασία λειτουργεί σε θερμοκρασία δωματίου (15-25℃), χωρίς λουτρό πάγου και φυγοκέντρηση χαμηλής θερμοκρασίας.
■ Ολόκληρο το κιτ είναι Χωρίς RNase, δεν χρειάζεται να ανησυχείτε για την αποικοδόμηση του RNA.
■ Η στήλη καθαρισμού DNA δεσμεύει ειδικά το DNA, έτσι ώστε το κιτ να μπορεί να αφαιρέσει τη μόλυνση από γονιδιωματικό DNA χωρίς να προσθέσει επιπλέον DNase.
■ Υψηλή απόδοση RNA: Μόνο RNA Η στήλη και η μοναδική φόρμουλα μπορούν να καθαρίσουν αποτελεσματικά το RNA.
■ Γρήγορη ταχύτητα: εύκολο στη χρήση και μπορεί να ολοκληρωθεί σε 11 λεπτά.
■ Ασφάλεια: Δεν απαιτείται οργανικό αντιδραστήριο.
■ Υψηλή ποιότητα: Το καθαρισμένο RNA είναι υψηλής καθαρότητας, χωρίς πρωτεΐνες και άλλες ακαθαρσίες και μπορεί να ανταποκριθεί σε διάφορα μεταγενέστερα πειράματα.
Εφαρμογή κιτ
Είναι κατάλληλο για εκχύλιση και καθαρισμό ολικού RNA από καλλιεργημένα κύτταρα σε πλάκες 96, 24, 12 και 6 φρεατίων.
Ροή εργασίας
Διάγραμμα
Το διάγραμμα μπαταρίας γέλης αγαρόζης του Cell Total RNA Isolation Kit επεξεργάστηκε τους παραπάνω διαφορετικούς αριθμούς κυττάρων, έκλουση όγκου 20μl, πάρτε 2μl καθαρισμένο ολικό RNA 1%.
Αποθήκευση και διάρκεια ζωής
Το κιτ μπορεί να αποθηκευτεί για 12 μήνες σε θερμοκρασία δωματίου (15–25 ℃) ή 2–8 ℃ για μεγαλύτερο χρονικό διάστημα (24 μήνες).
Το ρυθμιστικό διάλυμα cRL1 μπορεί να αποθηκευτεί στους 4 ℃ για 1 μήνα μετά την προσθήκη 2-υδροξυ-1-αιθανοθειόλης (προαιρετικό).
Το RNA δεν εκχυλίζεται ή οι αποδόσεις RNA είναι χαμηλές
Υπάρχει συχνά μια ποικιλία παραγόντων που επηρεάζουν την αποτελεσματικότητα ανάκτησης, όπως: η περιεκτικότητα RNA δείγματος ιστού, η μέθοδος λειτουργίας, ο όγκος έκλουσης κ.λπ.
1. Πραγματοποιήθηκε φυγοκέντρηση με παγόλουτρο ή κρυογονική (4 °C) κατά τη λειτουργία.
Σύσταση: Λειτουργήστε σε θερμοκρασία δωματίου (15-25°C) καθ' όλη τη διάρκεια της διαδικασίας, μην κάνετε παγόλουτρο και φυγοκεντρήστε σε χαμηλές θερμοκρασίες.
2. Ακατάλληλη διατήρηση του δείγματος ή υπερβολικός χρόνος αποθήκευσης του δείγματος.
Σύσταση: Αποθηκεύστε τα δείγματα στους -80 °C ή καταψύξτε σε υγρό άζωτο και αποφύγετε την επαναλαμβανόμενη χρήση κατάψυξης-απόψυξης.προσπαθήστε να χρησιμοποιήσετε φρέσκο ιστό ή καλλιεργημένα κύτταρα για εκχύλιση RNA.
3. Ανεπαρκής λύση δείγματος.
Σύσταση: Κατά την ομογενοποίηση ιστού, βεβαιωθείτε ότι ο ιστός είναι επαρκώς ομογενοποιημένος και ότι τα κύτταρα του ιστού είναι επαρκώς διαιρεμένα ώστε να εξηγείται η απελευθέρωση RNA.
4. Το εκλουστικό δεν προστίθεται σωστά.
Σύσταση: Επιβεβαιώστε ότι ddH χωρίς RNase2Το Ο προστίθεται στάγδην στο μέσο της μεμβράνης της στήλης καθαρισμού.
5. Ο σωστός όγκος απόλυτης αιθανόλης δεν προστέθηκε στο ρυθμιστικό διάλυμα RL2 ή στο ρυθμιστικό διάλυμα RW2.
Σύσταση: Ακολουθήστε τις οδηγίες, προσθέστε τον σωστό όγκο απόλυτης αιθανόλης στο Buffer RL2 και στο Buffer RW2 και ανακατέψτε καλά πριν χρησιμοποιήσετε το κιτ.
6. Η δόση του δείγματος ιστού δεν είναι κατάλληλη.
Σύσταση: Χρησιμοποιήστε 10-20 mg ιστού ή (1-5) × 106κύτταρα ανά 500 μl ρυθμιστικού διαλύματος RL1, καθώς η υπερβολική χρήση ιστού μπορεί να οδηγήσει σε μειωμένη εκχύλιση RNA.
7. Ακατάλληλος όγκος έκλουσης ή ατελής έκλουση.
Σύσταση: Ο όγκος έκλουσης της στήλης καθαρισμού είναι 50-200 μl.εάν το αποτέλεσμα έκλουσης δεν είναι ικανοποιητικό, συνιστάται η παράταση του χρόνου τοποθέτησης σε θερμοκρασία δωματίου μετά την προσθήκη προθερμασμένου ddH Χωρίς RNase2O, π.χ. για 5-10 λεπτά.
8. Η στήλη καθαρισμού έχει υπόλειμμα αιθανόλης μετά από πλύση με ρυθμιστικό διάλυμα RW2.
Σύσταση: Εάν υπάρχει υπόλειμμα αιθανόλης μετά την πλύση με ρυθμιστικό διάλυμα RW2, φυγοκέντρηση με άδεια σωλήνα για 1 λεπτό, ο χρόνος για τη λειτουργία φυγοκέντρησης με άδειο σωλήνα μπορεί να αυξηθεί στα 2 λεπτά ή η στήλη καθαρισμού μπορεί να τοποθετηθεί σε θερμοκρασία δωματίου για 5 λεπτά για να αφαιρεθεί επαρκώς η υπολειμματική αιθανόλη.
Το καθαρισμένο RNA αποικοδομείται
Η ποιότητα του καθαρισμένου RNA σχετίζεται με παράγοντες όπως η διατήρηση του δείγματος, η μόλυνση με RNase και ο χειρισμός κ.λπ.
1. Τα δείγματα ιστών δεν διατηρούνται έγκαιρα.
Σύσταση: Εάν δείγματα ιστού ή κύτταρα δεν χρησιμοποιηθούν έγκαιρα μετά τη συλλογή, κρυοσυντηρήστε αμέσως στους -80 °C ή σε υγρό άζωτο.Για να εξαγάγετε RNA, χρησιμοποιήστε ένα δείγμα ιστού ή κυττάρων που μόλις λάβατε όποτε είναι δυνατόν.
2. Επαναλαμβανόμενη κατάψυξη-απόψυξη δειγμάτων ιστού.
Σύσταση: Όταν αποθηκεύετε δείγματα ιστού, είναι καλύτερο να τα κόβετε σε μικρά κομμάτια για συντήρηση και να αφαιρείτε ένα από τα κομμάτια όταν τα χρησιμοποιείτε για να αποφύγετε την επαναλαμβανόμενη κατάψυξη-απόψυξη του δείγματος και την αποικοδόμηση του RNA.
3. Το RNase εισάγεται ή δεν φοράτε γάντια μιας χρήσης, μάσκες κ.λπ. κατά τη διάρκεια της επέμβασης.
Σύσταση: Τα πειράματα εξαγωγής RNA γίνονται καλύτερα σε ξεχωριστούς χώρους χειρισμού RNA και ο πίνακας καθαρίζεται πριν από το πείραμα.
Φοράτε γάντια και μάσκες μιας χρήσης κατά τη διάρκεια του πειράματος για να ελαχιστοποιήσετε την αποικοδόμηση του RNA που προκαλείται από την εισαγωγή της RNase.
4. Τα αντιδραστήρια μολύνονται με RNase κατά τη χρήση.
Σύσταση: Αντικαταστήστε με ένα νέο Animal Total RNA Isolation Kit για σχετικά πειράματα.
5. Οι σωλήνες φυγοκέντρησης, τα άκρα κ.λπ. που χρησιμοποιούνται στον χειρισμό του RNA είναι μολυσμένα με RNase.
Σύσταση: Επιβεβαιώστε ότι οι σωλήνες φυγοκέντρησης, τα άκρα, οι πιπέτες κ.λπ. που χρησιμοποιούνται στην εξαγωγή RNA είναι όλα Χωρίς RNase.
Το καθαρισμένο ληφθέν RNA επηρεάζει τα κατάντη πειράματα
Το RNA που καθαρίζεται από τη στήλη καθαρισμού, εάν τα ιόντα άλατος, η περιεκτικότητα σε πρωτεΐνη είναι πολύ μεγάλη θα επηρεάσει το κατάντη πείραμα, όπως: αντίστροφη μεταγραφή, Northern Blot et al.
1. Το εκλουόμενο RNA έχει υπολείμματα ιόντων άλατος.
Σύσταση: Επιβεβαιώστε ότι ο σωστός όγκος αιθανόλης έχει προστεθεί στο Buffer RW2 και εκτελέστε 2 πλύσεις στη στήλη καθαρισμού στην φυγοκεντρική ταχύτητα που υποδεικνύεται για λειτουργία.Εάν υπάρχει υπόλειμμα ιόντων άλατος, αφήστε τη στήλη καθαρισμού στο ρυθμιστικό διάλυμα RW2 για 5 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου και εκτελέστε φυγοκέντρηση για να μεγιστοποιήσετε την απομάκρυνση της μόλυνσης από αλάτι.
2. Κατάλοιπο αιθανόλης σε εκλουόμενο RNA.
Σύσταση: Επιβεβαιώστε ότι μετά την πλύση με ρυθμιστικό διάλυμα RW2, εκτελέστε τη λειτουργία φυγοκέντρησης με άδειο σωλήνα με την ταχύτητα φυγοκέντρησης που υποδεικνύεται για λειτουργία, αυξήστε τον χρόνο της λειτουργίας φυγοκέντρησης με άδειο σωλήνα στα 2 λεπτά εάν υπάρχουν ακόμη υπολείμματα αιθανόλης ή αφήστε το σε θερμοκρασία δωματίου για 5 m
