Κιτ απομόνωσης ολικού RNA φυτού Κιτ ολικού RNA Purificaiton για φυτά με χαμηλή περιεκτικότητα σε πολυσακχαρίτες και πολυφαινόλες
Προδιαγραφές
50 Προετοιμασίες, 200 Προετοιμασίες
Το κιτ χρησιμοποιεί τη στήλη spin και τον τύπο που αναπτύχθηκε από την Foregene, η οποία μπορεί αποτελεσματικά να εξάγει υψηλής καθαρότητας και υψηλής ποιότητας ολικό RNA από διάφορους φυτικούς ιστούς με χαμηλή περιεκτικότητα σε πολυσακχαρίτες και πολυφαινόλες.Για δείγματα φυτών με υψηλή περιεκτικότητα σε πολυσακχαρίτες ή πολυφαινόλες, συνιστάται η χρήση του Plant Total RNA Isolation Plus Kit για να έχετε καλύτερα αποτελέσματα εξαγωγής RNA.Το κιτ παρέχει τη στήλη DNA-Cleaning που μπορεί εύκολα να αφαιρέσει το γονιδιωματικό DNA από το υπερκείμενο και το κυτταρόλυμα.Η στήλη μόνο με RNA μπορεί να δεσμεύσει αποτελεσματικά το RNA.Το κιτ μπορεί να επεξεργαστεί μεγάλο αριθμό δειγμάτων ταυτόχρονα.
Ολόκληρο το σύστημα δεν περιέχει RNase, επομένως το καθαρισμένο RNA δεν θα αποικοδομηθεί.Το ρυθμιστικό διάλυμα PRW1 και το ρυθμιστικό διάλυμα PRW2 μπορούν να διασφαλίσουν ότι το RNA που λαμβάνεται δεν έχει μολυνθεί από πρωτεΐνες, DNA, ιόντα και οργανικές ενώσεις.
Εξαρτήματα κιτ
| Buffer PSL1, Buffer PS, Buffer PSL2 |
| Ρυθμιστικό διάλυμα PRW1, Ρυθμιστικό διάλυμα PRW2 |
| ddH χωρίς RNase2Ο, Στήλη Καθαρισμού DNA |
| RNA-Μόνο Στήλη |
| Οδηγίες |
Χαρακτηριστικά & πλεονεκτήματα
■ Λειτουργία σε θερμοκρασία δωματίου (15-25℃) σε όλη τη διάρκεια της διαδικασίας, χωρίς παγόλουτρο και φυγοκέντρηση χαμηλής θερμοκρασίας.
■ Πλήρες κιτ Χωρίς RNase, δεν χρειάζεται να ανησυχείτε για την αποικοδόμηση του RNA.
■ Η στήλη καθαρισμού DNA συνδέεται ειδικά με το DNA, έτσι ώστε το κιτ να μπορεί να αφαιρέσει τη μόλυνση του γονιδιωματικού DNA χωρίς την προσθήκη DNase.
■ Υψηλή απόδοση RNA: Μόνο RNA Η στήλη και η μοναδική φόρμουλα μπορούν να καθαρίσουν αποτελεσματικά το RNA.
■ Γρήγορη ταχύτητα: εύκολο στη χρήση και μπορεί να ολοκληρωθεί μέσα σε 30 λεπτά.
■ Ασφάλεια: δεν απαιτείται οργανικό αντιδραστήριο.
■ Υψηλή ποιότητα: Τα καθαρισμένα θραύσματα RNA είναι υψηλής καθαρότητας, απαλλαγμένα από πρωτεΐνες και άλλες ακαθαρσίες και μπορούν να ικανοποιήσουν διάφορες μεταγενέστερες πειραματικές εφαρμογές.
Εφαρμογή κιτ
Είναι κατάλληλο για την εκχύλιση και τον καθαρισμό ολικού RNA από φρέσκα ή κατεψυγμένα δείγματα φυτικού ιστού (ιδιαίτερα φρέσκου φυτικού ιστού) με χαμηλή περιεκτικότητα σε πολυσακχαρίτες και πολυφαινόλη.
Ροή εργασίας
Διάγραμμα
Το Plant Total RNA Isolation Kit Plus επεξεργάστηκε 50 mg φρέσκων φύλλων πολυσακχαριτών και πολυφαινολών και 5% καθαρισμένο RNA δοκιμάστηκε με ηλεκτροφόρηση.
1: Μπανάνα
2: Γκίνγκο
3: Βαμβάκι
4: Ρόδι
Αποθήκευση και διάρκεια ζωής
Το κιτ μπορεί να αποθηκευτεί για 12 μήνες σε θερμοκρασία δωματίου (15–25 ℃) σε ξηρό περιβάλλον και 2–8 ℃ για μεγαλύτερο χρονικό διάστημα (24 μήνες).
Το ρυθμιστικό διάλυμα PSL1 μπορεί να αποθηκευτεί στους 4 ℃ για 1 μήνα μετά την προσθήκη 2-υδροξυ-1-αιθανοθειόλης (προαιρετικό).
Οδηγός ανάλυσης προβλημάτων
Η ακόλουθη ανάλυση των προβλημάτων που μπορεί να αντιμετωπίσετεΣύνολο φυτώνRNA extraction will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.
Η στήλη περιστροφής είναι βουλωμένη
Η απόφραξη της στήλης spin θα προκαλέσει τη μείωση της απόδοσης RNA ή ακόμη και την αδυναμία καθαρισμού για τη λήψη RNA και η ποιότητα του λαμβανόμενου RNA θα είναι χαμηλή.
Ανάλυση κοινής αιτίας:
1. Το δείγμα δεν έχει σπάσει εντελώς.
Ο ατελής κατακερματισμός του δείγματος μπορεί να μπλοκάρει τη στήλη καθαρισμού DNA, η οποία μπορεί επίσης να επηρεάσει την απόδοση και την ποιότητα του RNA.Συνιστούμε κατά την εκτέλεση του κατακερματισμού του δείγματος, να αλέθετε γρήγορα επαρκείς ποσότητες υγρού αζώτου για να διασπαστούν όσο το δυνατόν περισσότερο οι ιστοί όπως τα κυτταρικά τοιχώματα και οι κυτταρικές μεμβράνες των δειγμάτων.Για δείγματα φυτών πολυσακχαριτών πολυφαινόλης, συνιστούμε να χρησιμοποιείτε το Plant Total RNA Isolation Kit Plus.
2. Αναρροφήστε το υπερκείμενο που απομονώθηκε από τη στήλη καθαρισμού DNA, αναρροφήστε το πιθανό ίζημα κυτταρικών υπολειμμάτων.
Το αναρροφημένο ίζημα κυτταρικών υπολειμμάτων μπορεί να φράξει τη στήλη μόνο με RNA κατά τη διάρκεια των διαδικασιών προσρόφησης RNA (βλ. βήμα 5 της διαδικασίας, βήμα 6 της διαδικασίας πολυσακχαρίτη πολυφαινόλης).Συνιστούμε να λαμβάνεται μέριμνα κατά την αναρρόφηση αυτού του υπερκειμένου για να αποφευχθεί η αναρρόφηση κυτταρικών υπολειμμάτων.
3. Η αρχική ποσότητα δείγματος είναι πολύ μεγάλη.
Η υπερβολική χρήση δείγματος θα οδηγήσει σε ατελή κατακερματισμό του δείγματος ή ατελή λύση των κυττάρων από το ρυθμιστικό διάλυμα PRL1 ή το ρυθμιστικό διάλυμα PSL1, με αποτέλεσμα μια φραγμένη στήλη καθαρισμού για λειτουργίες καθαρισμού.Το Plant Total RNA Isolation Kit έχει ένα αρχικό μέγιστο 50 mg ανά μεμονωμένο καθαρισμό ενός χειρουργημένου δείγματος.Για δείγματα φυτών πολυσακχαριτών πολυφαινόλης, σας συνιστούμε να δοκιμάσετε το Plant Total RNA Isolation Kit Plus.
4. Η θερμοκρασία της φυγόκεντρου είναι πολύ χαμηλή.
Απομόνωση και καθαρισμός πλήρους RNA εκτός από τη διάσπαση του ιστού δείγματος με υγρό άζωτο, όλα τα βήματα εκτελούνται σε θερμοκρασία δωματίου (20-25 °C).Ορισμένες φυγόκεντρες χαμηλής θερμοκρασίας έχουν θερμοκρασίες κάτω των 20 °C, γεγονός που μπορεί να προκαλέσει μπλοκαρίσματα στη στήλη καθαρισμού DNA και/ή στη στήλη μόνο με RNA.Εάν συμβεί αυτό, ρυθμίστε τη θερμοκρασία της φυγοκέντρησης στους 20-25 °C και προθερμάνετε το μείγμα λύσης ή/και την προσθήκη του υπερκειμένου διαχωρισμού αιθανόλης στους 37 °C.
Δεν έχει εκχυλιστεί RNA ή η απόδοση RNA είναι χαμηλή
Υπάρχουν συνήθως πολλοί παράγοντες που επηρεάζουν την αποτελεσματικότητα ανάκτησης, όπως: η περιεκτικότητα σε δείγμα RNA, η μέθοδος λειτουργίας, ο όγκος έκλουσης κ.λπ.
Ανάλυση κοινών αιτιών ως εξής:
1. Πραγματοποιήθηκε φυγοκέντρηση σε παγόλουτρο ή χαμηλή θερμοκρασία (4°C) κατά τη διάρκεια της επέμβασης.
Πρόταση: Λειτουργήστε σε θερμοκρασία δωματίου (15-25°C) σε όλη τη διαδικασία, μην κάνετε παγόλουτρο και φυγοκέντρηση σε χαμηλή θερμοκρασία.
2.Το RNA έχει υποβαθμιστεί λόγω ακατάλληλης συντήρησης του δείγματος ή μακροχρόνιας διατήρησης του δείγματος.
Σύσταση: Τα πρόσφατα συλλεγμένα δείγματα πρέπει να καταψύχονται γρήγορα σε υγρό άζωτο και στη συνέχεια να φυλάσσονται στους -80°C για μεγάλο χρονικό διάστημα, αποφεύγοντας την επαναλαμβανόμενη κατάψυξη και απόψυξη των δειγμάτων.ή εμποτίστε αμέσως τα δείγματα σε διάλυμα σταθεροποιητή RNA RNAlater (δείγματα ζώων).
3.Ανεπαρκής κατακερματισμός και λύση του δείγματος οδηγεί σε απόφραξη της στήλης καθαρισμού.
Πρόταση: Όταν τρίβετε τον ιστό, βεβαιωθείτε ότι το χαρτομάντιλο είναι επαρκώς αλεσμένο και μεταφέρετέ το γρήγορα στο προπαρασκευασμένο Buffer PSL1 (επιβεβαιώστε ότι έχει προστεθεί η σωστή αναλογία β-ΜΕ, βλέπε βήμα 1 της διαδικασίας).
4.Το εκλουστικό προστέθηκε λανθασμένα.
Πρόταση: Βεβαιωθείτε ότι το ddH χωρίς RNase2Το O στάζει στο μέσο της μεμβράνης της στήλης καθαρισμού.
5. Ο σωστός όγκος απόλυτης αιθανόλης δεν προστέθηκε στο Buffer PSL2 ή στο Buffer PRW2.
Πρόταση: Ακολουθήστε τις οδηγίες, προσθέστε τον σωστό όγκο απόλυτης αιθανόλης στο Buffer PSL2 και στο Buffer PRW2 και ανακατέψτε καλά πριν χρησιμοποιηθεί το κιτ.
6.Η ποσότητα του δείγματος ιστού είναι ακατάλληλη.
Πρόταση: Χρησιμοποιήστε 50 mg ιστού ανά 500 μl ρυθμιστικού διαλύματος PSL1.Η χρήση υπερβολικού ιστού θα μειώσει την ποσότητα του RNA που εξάγεται και η καθαρότητα του προκύπτοντος RNA θα μειωθεί επίσης.Συνιστούμε ανεπιφύλακτα ότι η αρχική δόση δείγματος δεν πρέπει να υπερβαίνει τα 50 mg ανά λειτουργία εκχύλισης RNA.
7. Ακατάλληλος όγκος έκλουσης ή ατελής έκλουση.
Πρόταση: Ο όγκος του διαλύματος έκλουσης της στήλης καθαρισμού είναι 50-200 μl.εάν το αποτέλεσμα έκλουσης δεν είναι ικανοποιητικό, συνιστάται η παράταση του χρόνου σε θερμοκρασία δωματίου μετά την προσθήκη προθερμασμένου ddH Χωρίς RNase2O, όπως 5-10 λεπτά.
8. Η στήλη καθαρισμού έχει υπόλειμμα αιθανόλης μετά από πλύση με ρυθμιστικό διάλυμα PRW2.
Πρόταση: Εάν ο άδειος σωλήνας φυγοκεντρηθεί για 1 λεπτό και υπάρχει ακόμα αιθανόλη μετά το πλύσιμο στο Buffer PRW2, μπορείτε να αυξήσετε το χρόνο φυγοκέντρησης του άδειου σωλήνα στα 2 λεπτά ή να τοποθετήσετε τη στήλη καθαρισμού σε θερμοκρασία δωματίου για 5 λεπτά για να αφαιρέσετε πλήρως την υπολειμματική αιθανόλη.
9.Το κιτ χρησιμοποιήθηκε λανθασμένα.
Πρόταση: Για φυτικά δείγματα πολυφαινολικών πολυσακχαριτών, με τη χρήση κοινών κιτ όπως το Plant Total RNA Isolation Kit ενδέχεται να μην είναι δυνατή η λήψη ιδανικών δειγμάτων RNA.Σας συνιστούμε να χρησιμοποιήσετε το Plant Total RNA IsolationKit Plus, το οποίο είναι ειδικά σχεδιασμένο για φυτικά δείγματα πολυφαινολικού πολυσακχαρίτη.Ένα κιτ ειδικά σχεδιασμένο για την εξαγωγή RNA από δείγματα φυτών πολυφαινόλης και πολυσακχαρίτη.
Η τιμή OD260/OD280 είναι χαμηλή
Έκλουση RNA με ddH2Το O και χρησιμοποιείται για μετρήσεις φασματοφωτόμετρου έχει ως αποτέλεσμα χαμηλές τιμές OD260/OD280.Συνιστούμε τη χρήση 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 (αντί για ddH Χωρίς RNase2O για έκλουση RNA) για να λάβετε σχετικά σωστές τιμές OD260/OD280, ανατρέξτε στην ενότητα «Δοκιμασίες συγκέντρωσης και καθαρισμού RNA» στη σελίδα 19.
Το καθαρισμένο RNA αποικοδομείται
Η ποιότητα του καθαρισμένου RNA σχετίζεται με παράγοντες όπως η διατήρηση του δείγματος, η μόλυνση με RNase και ο χειρισμός.
Ανάλυση κοινών αιτιών:
1. Τα δείγματα ιστών δεν αποθηκεύτηκαν εγκαίρως μετά τη συλλογή.
Σύσταση: Εάν τα δείγματα ιστού δεν χρησιμοποιηθούν εγκαίρως μετά τη συλλογή, αποθηκεύστε τα σε υγρό άζωτο σε χαμηλή θερμοκρασία αμέσως ή μεταφέρετέ τα στους -80°C για μακροχρόνια αποθήκευση μετά από γρήγορη κατάψυξη σε υγρό άζωτο ή βυθίστε αμέσως τα δείγματα σε διάλυμα σταθεροποιητή RNA RNAlater (ζωικά δείγματα ).Για την εξαγωγή RNA, προσπαθήστε να χρησιμοποιήσετε πρόσφατα συλλεγμένα δείγματα ιστού.
2. Επαναλαμβανόμενη κατάψυξη και απόψυξη δειγμάτων ιστού.
Πρόταση: Όταν αποθηκεύετε δείγματα ιστού, είναι καλύτερο να τα κόβετε σε μικρά κομμάτια για συντήρηση και να αφαιρείτε ένα μέρος τους όταν τα χρησιμοποιείτε για να αποφύγετε την υποβάθμιση του RNA που προκαλείται από την επαναλαμβανόμενη κατάψυξη και απόψυξη των δειγμάτων.
3. Η RNase εισάγεται στο χειρουργείο ή δεν φοριούνται γάντια μιας χρήσης, μάσκες κ.λπ.
Πρόταση: Τα πειράματα εξαγωγής RNA εκτελούνται καλύτερα σε ξεχωριστές λειτουργίες RNA και ο εργαστηριακός πίνακας θα πρέπει να καθαρίζεται πριν από το πείραμα και πρέπει να φοράτε γάντια και μάσκες μιας χρήσης κατά τη διάρκεια του πειράματος για να αποφευχθεί η υποβάθμιση του RNA που προκαλείται από την εισαγωγή της RNase στο μέγιστο βαθμό.
4. Το αντιδραστήριο μολύνεται από RNase κατά τη χρήση.
Πρόταση: Αντικαταστήστε με μια νέα σειρά κιτ εξαγωγής ολικού RNA φυτού για σχετικά πειράματα.
5. Οι σωλήνες φυγοκέντρησης και τα άκρα της πιπέτας που χρησιμοποιούνται για τον χειρισμό του RNA είναι μολυσμένα με RNase.
Πρόταση: Βεβαιωθείτε ότι οι σωλήνες φυγοκέντρησης, τα άκρα της πιπέτας, οι πιπέτες κ.λπ. που χρησιμοποιούνται στην εξαγωγή RNA είναι όλα Χωρίς RNase.
Εγχειρίδια οδηγιών:
