Κιτ απομόνωσης ιικού DNA&RNA Κιτ προετοιμασίας καθαρισμού ιικού DNA και RNA
Προδιαγραφές
50 Προετοιμασίες, 200 Προετοιμασίες
Το κιτ απομόνωσης εκχύλισης νουκλεϊκού οξέος καθαρισμού ιού χρησιμοποιεί τη στήλη περιστροφής και τον τύπο που αναπτύχθηκε από την Foregene, η οποία μπορεί να εξάγει αποτελεσματικά ιικό RNA υψηλής καθαρότητας και υψηλής ποιότητας από δείγματα όπως πλάσμα, ορός, σωματικό υγρό χωρίς κύτταρα και υπερκείμενο κυτταροκαλλιέργειας.Το κιτ προσθέτει ειδικά Linear Acrylamide, το οποίο μπορεί εύκολα να συλλάβει μικρές ποσότητες RNA από τα δείγματα.Η στήλη RNA-Only μπορεί να δεσμεύσει αποτελεσματικά το RNA.Το κιτ μπορεί να επεξεργαστεί μεγάλο αριθμό δειγμάτων ταυτόχρονα.
Ολόκληρο το κιτ δεν περιέχει RNase, επομένως το καθαρισμένο RNA δεν θα αποικοδομηθεί.Το ρυθμιστικό διάλυμα viRW1 και το ρυθμιστικό διάλυμα viRW2 μπορούν να εξασφαλίσουν ότι το ληφθέν ιικό νουκλεϊκό οξύ δεν περιέχει πρωτεΐνη, νουκλεάση ή άλλες ακαθαρσίες, οι οποίες μπορούν να χρησιμοποιηθούν απευθείας για πειράματα μοριακής βιολογίας κατάντη.
Εξαρτήματα κιτ
| Γραμμικό Ακρυλαμίδιο |
| Buffer DRL |
| Buffer RW1, Buffer RW2 |
| ddH χωρίς RNase2O |
| Στήλη DNA/RNA |
| Οδηγίες |
Χαρακτηριστικά & πλεονεκτήματα
■ Λειτουργία σε θερμοκρασία δωματίου (15-25℃) σε όλη τη διάρκεια της διαδικασίας, χωρίς παγόλουτρο και φυγοκέντρηση χαμηλής θερμοκρασίας.
■ Πλήρες κιτ Χωρίς RNase, δεν χρειάζεται να ανησυχείτε για την αποικοδόμηση του RNA.
■ Υψηλή απόδοση νουκλεϊκού οξέος: Μόνο DNA/RNA Η στήλη και η μοναδική φόρμουλα μπορούν να καθαρίσουν αποτελεσματικά το DNA και το RNA.
■ Μεγάλη ικανότητα επεξεργασίας δειγμάτων: έως και 200μl δείγματα μπορούν να υποβληθούν σε επεξεργασία κάθε φορά.
■ Γρήγορη ταχύτητα: εύκολο στη χρήση και μπορεί να ολοκληρωθεί μέσα σε 20 λεπτά.
■ Ασφάλεια: δεν απαιτείται οργανικό αντιδραστήριο.
■ Υψηλή ποιότητα: Τα καθαρισμένα θραύσματα RNA είναι υψηλής καθαρότητας, απαλλαγμένα από πρωτεΐνες και άλλες ακαθαρσίες και μπορούν να ικανοποιήσουν διάφορες μεταγενέστερες πειραματικές εφαρμογές.
Εφαρμογή κιτ
Είναι κατάλληλο για την εκχύλιση και τον καθαρισμό ιικού νουκλεϊκού οξέος σε δείγματα όπως πλάσμα, ορός, σωματικό υγρό χωρίς κύτταρα και υπερκείμενο κυτταροκαλλιέργειας.
Ροή εργασίας
Διάγραμμα
Αποθήκευση και διάρκεια ζωής
■ Αυτό το κιτ μπορεί να αποθηκευτεί για 24 μήνες σε ξηρές συνθήκες σε θερμοκρασία δωματίου (15-25℃).εάν χρειάζεται να αποθηκευτεί για μεγαλύτερο χρονικό διάστημα, μπορεί να αποθηκευτεί σε θερμοκρασία 2–8℃.
■ Το γραμμικό διάλυμα ακρυλαμιδίου μπορεί να αποθηκευτεί σε θερμοκρασία δωματίου για 7 ημέρες.Μετά την παραλαβή του κιτ, βγάλτε το και φυλάξτε το στους -20°C.
■ Μετά την προσθήκη Linear Acrylamide στο Buffer DRL, μπορεί να αποθηκευτεί στους 2-8°C για έως και 48 ώρες.Χρησιμοποιήστε την έτοιμη λύση.
Οδηγός ανάλυσης προβλημάτων
Ακολουθεί μια ανάλυση των προβλημάτων που μπορεί να προκύψουν κατά την εξαγωγή ιικού DNA/RNA, ελπίζοντας να είναι χρήσιμη για τα πειράματά σας.Επιπλέον, για άλλα πειραματικά ή τεχνικά προβλήματα εκτός από τις οδηγίες λειτουργίας και την ανάλυση προβλημάτων, έχουμε ειδική τεχνική υποστήριξη για να σας βοηθήσουμε.Εάν έχετε οποιεσδήποτε ανάγκες, επικοινωνήστε μαζί μας: 028-83360257 ή E-mail:
Tech@foregene.com.
Χωρίς εκχύλιση νουκλεϊκού οξέος ή χαμηλή απόδοση νουκλεϊκού οξέος
Υπάρχουν συνήθως πολλοί παράγοντες που επηρεάζουν την αποτελεσματικότητα ανάκτησης, όπως: η περιεκτικότητα του δείγματος σε νουκλεϊκό οξύ, η μέθοδος λειτουργίας, ο όγκος έκλουσης κ.λπ.
Ανάλυση κοινών αιτιών:
1. Πραγματοποιήθηκε φυγοκέντρηση σε λουτρό πάγου ή χαμηλής θερμοκρασίας (4°C) κατά τη διάρκεια της διαδικασίας.
Πρόταση: Λειτουργήστε σε θερμοκρασία δωματίου (15-25°C) καθ' όλη τη διάρκεια της διαδικασίας, μην κάνετε παγόλουτρο και φυγοκέντρηση σε χαμηλή θερμοκρασία.
2. Το δείγμα αποθηκεύτηκε ακατάλληλα ή το δείγμα αποθηκεύτηκε για πολύ μεγάλο χρονικό διάστημα.
Σύσταση: Αποθηκεύστε τα δείγματα στους -80°C και αποφύγετε την επαναλαμβανόμενη κατάψυξη και απόψυξη.προσπαθήστε να χρησιμοποιήσετε πρόσφατα συλλεγμένα δείγματα για εκχύλιση νουκλεϊκού οξέος.
3. Ανεπαρκής λύση δείγματος.
Σύσταση: Βεβαιωθείτε ότι το δείγμα και το διάλυμα εργασίας λύσης αναμειγνύονται καλά και επωάζονται σε θερμοκρασία δωματίου (15-25°C) για 10 λεπτά.
4. Λανθασμένη προσθήκη υγρού έκλουσης.
Πρόταση: Βεβαιωθείτε ότι το ddH2O Χωρίς RNase προστίθεται στάγδην στο μέσο της μεμβράνης της στήλης καθαρισμού και μην το ρίχνετε στον δακτύλιο της στήλης καθαρισμού.
5. Ο σωστός όγκος απόλυτης αιθανόλης δεν προστέθηκε στο ρυθμιστικό διάλυμα RW2.
Πρόταση: Ακολουθήστε τις οδηγίες, προσθέστε τον σωστό όγκο απόλυτης αιθανόλης στο Buffer RW2 και ανακατέψτε καλά πριν χρησιμοποιήσετε το κιτ.
6. Ακατάλληλος όγκος δείγματος.
Πρόταση: 200µl δείγματος υποβάλλονται σε επεξεργασία για κάθε 500μl ρυθμιστικού DRL.Η υπερβολική επεξεργασία του δείγματος θα έχει ως αποτέλεσμα χαμηλότερη απόδοση εκχύλισης νουκλεϊκού οξέος.
7. Ακατάλληλος όγκος έκλουσης ή ατελής έκλουση.
Σύσταση: Ο όγκος του διαλύματος έκλουσης της στήλης καθαρισμού είναι 30-50μl.εάν το αποτέλεσμα έκλουσης δεν είναι ικανοποιητικό, συνιστάται η παράταση του χρόνου σε θερμοκρασία δωματίου μετά την προσθήκη προθερμασμένου ddH2O Χωρίς RNase, όπως 5-10 λεπτά.
8. Η αιθανόλη παραμένει στη στήλη μετά από πλύση με ρυθμιστικό διάλυμα RW2.
Πρόταση: Εάν παραμείνει αιθανόλη μετά τη φυγοκέντρηση με ρυθμιστικό διάλυμα RW2 για 2 λεπτά, η στήλη μπορεί να τοποθετηθεί σε θερμοκρασία δωματίου για 5 λεπτά μετά τη φυγοκέντρηση για να αφαιρεθεί πλήρως η υπολειμματική αιθανόλη.
Το καθαρισμένο νουκλεϊκό οξύ αποικοδομείται
Η ποιότητα του καθαρισμένου νουκλεϊκού οξέος σχετίζεται με τη διατήρηση του δείγματος, τη μόλυνση με RNase, τη λειτουργία και άλλους παράγοντες.Ανάλυση κοινών αιτιών:
1. Τα δείγματα που συλλέχθηκαν δεν αποθηκεύτηκαν έγκαιρα.
Πρόταση: Εάν το δείγμα δεν χρησιμοποιηθεί εγκαίρως μετά τη συλλογή, αποθηκεύστε το αμέσως στους -80°C σε χαμηλή θερμοκρασία.Για την εξαγωγή RNA, προσπαθήστε να χρησιμοποιήσετε πρόσφατα συλλεγμένα δείγματα.
2. Συλλέξτε δείγματα και καταψύξτε και αποψύξτε επανειλημμένα.
Πρόταση: Αποφύγετε την κατάψυξη και την απόψυξη (όχι περισσότερες από μία φορές) κατά τη συλλογή και αποθήκευση των δειγμάτων, διαφορετικά η απόδοση νουκλεϊκού οξέος θα μειωθεί.
3. Η RNase εισάγεται στο χειρουργείο ή δεν φοριούνται γάντια μιας χρήσης, μάσκες κ.λπ.
Σύσταση: Τα πειράματα εξαγωγής RNA γίνονται καλύτερα σε ξεχωριστό χειρουργείο RNA και το εργαστηριακό τραπέζι θα πρέπει να καθαρίζεται πριν από το πείραμα.
Φοράτε γάντια και μάσκες μιας χρήσης κατά τη διάρκεια του πειράματος για να αποφύγετε την υποβάθμιση του RNA που προκαλείται από την εισαγωγή της RNase στο μεγαλύτερο βαθμό.
4. Το αντιδραστήριο μολύνθηκε με RNase κατά τη χρήση.
Σύσταση: Αντικαταστήστε με ένα νέο κιτ απομόνωσης DNA/RNA ιού για σχετικά πειράματα.
5. Οι σωλήνες φυγοκέντρησης και τα άκρα της πιπέτας που χρησιμοποιούνται για τον χειρισμό του RNA είναι μολυσμένα με RNase.
Πρόταση: Βεβαιωθείτε ότι οι σωλήνες φυγοκέντρησης, τα άκρα της πιπέτας, οι πιπέτες κ.λπ. που χρησιμοποιούνται για την εξαγωγή RNA είναι όλα Χωρίς RNase.
Το καθαρισμένο νουκλεϊκό οξύ επηρεάζει τα κατάντη πειράματα
Το DNA και το RNA που καθαρίζονται από τη στήλη καθαρισμού, εάν η περιεκτικότητα σε ιόντα άλατος και πρωτεΐνη είναι πολύ υψηλή, θα επηρεάσει τα κατάντη πειράματα, όπως: ενίσχυση PCR, αντίστροφη μεταγραφή κ.λπ.
1. Το εκλουόμενο DNA και RNA έχουν υπολειμματικά ιόντα άλατος.
Πρόταση: Βεβαιωθείτε ότι έχει προστεθεί ο σωστός όγκος απόλυτης αιθανόλης στο Buffer RW2 και πλύνετε τη στήλη καθαρισμού δύο φορές με την ταχύτητα φυγοκέντρησης που καθορίζεται στις οδηγίες λειτουργίας.Εκτελέστε φυγοκέντρηση για να ελαχιστοποιήσετε τη μόλυνση με ιόντα άλατος.
2. Το εκλουόμενο DNA και RNA έχουν υπολείμματα αιθανόλης.
Πρόταση: Αφού επιβεβαιώσετε την πλύση με Buffer RW2, πραγματοποιήστε φυγοκέντρηση σε άδειο σωλήνα με την ταχύτητα φυγοκέντρησης στις οδηγίες λειτουργίας.Εάν υπάρχει ακόμα υπόλειμμα αιθανόλης, μπορείτε να φυγοκεντρήσετε τον άδειο σωλήνα και στη συνέχεια να τον τοποθετήσετε σε θερμοκρασία δωματίου για 5 λεπτά για να αφαιρέσετε τα υπολείμματα αιθανόλης στο μέγιστο βαθμό.
Εγχειρίδια οδηγιών:
Εγχειρίδιο οδηγιών Viral DNA&RNA Isolation Kit
