Στο πρώιμο στάδιο της επιδημίας, λόγω της ταχείας ανάπτυξης, η ταχεία διάγνωση των ύποπτων ασθενών είναι το κλειδί για την πρόληψη του COVID-19.Ορισμένα εγκεκριμένα αντιδραστήρια ανίχνευσης νουκλεϊκών οξέων έχουν σύντομο χρόνο ανάπτυξης και υπάρχουν προβλήματα όπως εσπευσμένη επιβεβαίωση απόδοσης, ανεπαρκής βελτιστοποίηση αντιδραστηρίων και μεγάλες διαφορές μεταξύ των παρτίδων.Τα προβλήματα διαφόρων κλινικών εργαστηρίων σε διάφορες πτυχές της διαδικασίας ανίχνευσης νουκλεϊκού οξέος μπορεί επίσης να επηρεάσουν την ακρίβεια των αποτελεσμάτων ανίχνευσης νουκλεϊκών οξέων.Αυτό το άρθρο θα επικεντρωθεί στους βασικούς συνδέσμους και τα σημεία στην τρέχουσα ανίχνευση νουκλεϊκού οξέος SARS-CoV-2 και θα αναλύσει τα προβλήματα της ψευδώς αρνητικής και θετικής επανεξέτασης της εργαστηριακής ανίχνευσης νουκλεϊκών οξέων και της κλινικής ασυνέπειας.

Αρχές ανίχνευσης νουκλεϊκού οξέος SARS-CoV-2

Ο SARS-CoV-2 είναι ένας ιός RNA με αλληλουχία γονιδιώματος περίπου 29 kb, με 10 γονίδια, τα οποία μπορούν να κωδικοποιήσουν αποτελεσματικά 10 πρωτεΐνες.Οι ιοί αποτελούνται από RNA και πρωτεΐνη, και το πιο εξωτερικό στρώμα είναι μια εξωτερική επικάλυψη που αποτελείται από λιπίδια και γλυκοπρωτεΐνες.Στο εσωτερικό, το καψίδιο πρωτεΐνης τυλίγει το RNA μέσα σε αυτό, προστατεύοντας έτσι το εύκολα αποικοδομήσιμο RNA (P1).

P1 Δομή του SARS-COV-2

Οι ιοί εισβάλλουν στα κύτταρα μέσω συγκεκριμένων υποδοχέων κυτταρικής επιφάνειας για να προκαλέσουν μόλυνση και χρησιμοποιούν τα κύτταρα ξενιστές για να αναπαραχθούν.

Η αρχή της ανίχνευσης του ιικού νουκλεϊκού οξέος είναι η έκθεση του ιικού RNA μέσω ενός κυτταρολύματος και στη συνέχεια η χρήση φθορίζουσας αλυσιδωτής αντίδρασης αντίστροφης μεταγραφής-πολυμεράσης (RT-PCR) σε πραγματικό χρόνο για ανίχνευση.

Το κλειδί για την αρχή ανίχνευσης είναι η χρήση εκκινητών και ανιχνευτών για την επίτευξη «στοχευμένης αντιστοίχισης» αλληλουχιών νουκλεϊκών οξέων, δηλαδή, για την εύρεση της αλληλουχίας νουκλεϊκού οξέος του SARS-CoV-2 που είναι διαφορετική από άλλους ιούς σε περίπου 30.000 βάσεις (η ομοιότητα του νουκλεϊκού οξέος με άλλους ιούς).

Οι εκκινητές και οι ανιχνευτές ταιριάζουν σε μεγάλο βαθμό με τη συγκεκριμένη περιοχή του νουκλεϊκού οξέος SARS-CoV-2, δηλαδή η ειδικότητα είναι πολύ ισχυρή.Μόλις το αποτέλεσμα ενίσχυσης φθορισμού RT-PCR σε πραγματικό χρόνο του προς δοκιμή δείγματος είναι θετικό, αποδεικνύει ότι υπάρχει SARS-CoV-2 στο δείγμα.Βλέπε P2.

P2 Βήματα προσδιορισμού νουκλεϊκού οξέος SARS-CoV-2 (φθορισμού RT-PCR σε πραγματικό χρόνο)

Προϋποθέσεις και απαιτήσεις εργαστηρίου για ανίχνευση νουκλεϊκού οξέος SARS-CoV-2

Τα εργαστήρια δοκιμών νουκλεϊκών οξέων είναι τα πιο ιδανικά για περιβάλλοντα αρνητικής πίεσης και θα πρέπει να δίνουν προσοχή στην παρακολούθηση της πίεσης, να διατηρούν τη ροή του αέρα και να εξαλείφουν τα αερολύματα.Το προσωπικό δοκιμών νουκλεϊκών οξέων πρέπει να έχει τα αντίστοιχα προσόντα, να λάβει σχετική εκπαίδευση στην αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης και να περάσει την αξιολόγηση.Το εργαστήριο θα πρέπει να ελέγχεται αυστηρά, να υπάρχει ζώνη και να απαγορεύεται αυστηρά η είσοδος άσχετου προσωπικού.Ο καθαρός χώρος πρέπει να αερίζεται και να απολυμαίνεται στη θέση του.Τα σχετικά αντικείμενα τοποθετούνται σε ζώνες, τα καθαρά και τα βρώμικα διαχωρίζονται, αντικαθίστανται εγκαίρως και απολυμαίνονται στη θέση τους.Τακτική απολύμανση: Το απολυμαντικό που περιέχει χλώριο είναι η κύρια λύση για μεγαλύτερες επιφάνειες και 75% αλκοόλ μπορεί να χρησιμοποιηθεί για μικρές επιφάνειες.Ένας καλός τρόπος αντιμετώπισης των αερολυμάτων είναι να ανοίγετε τα παράθυρα για αερισμό και η απολύμανση του αέρα μπορεί επίσης να πραγματοποιηθεί με υπεριώδεις ακτίνες, διήθηση και απολύμανση αέρα.

Βασικοί σύνδεσμοι και παράμετροι προσδιορισμού νουκλεϊκού οξέος SARS-CoV-2 (φθορισμού RT-PCR σε πραγματικό χρόνο)

Αν και τα εργαστήρια γενικά δίνουν μεγάλη προσοχή στην «ανίχνευση» νουκλεϊκού οξέος, στην πραγματικότητα, η «εξαγωγή» νουκλεϊκού οξέος είναι επίσης ένα από τα βασικά βήματα για την επιτυχή ανίχνευση, η οποία σχετίζεται στενά με τη συλλογή και αποθήκευση δειγμάτων ιού.

Επί του παρόντος, τα πιο ευρέως χρησιμοποιούμενα αναπνευστικά δείγματα, όπως τα ρινοφαρυγγικά επιχρίσματα, χρησιμοποιούν τη δεύτερη μέθοδο, η οποία είναι ένα διάλυμα αδρανοποίησης (συντήρησης) που παρασκευάζεται με βάση την εκχύλιση νουκλεϊκού οξέος και το διάλυμα λύσης.Από τη μία πλευρά, αυτό το διάλυμα διατήρησης του ιού μπορεί να μετουσιώσει την πρωτεΐνη του ιού, να χάσει τη δραστηριότητά της και να μην είναι πλέον μολυσματικό και να βελτιώσει την ασφάλεια του σταδίου μεταφοράς και ανίχνευσης.Από την άλλη πλευρά, μπορεί να σπάσει απευθείας τον ιό για να απελευθερώσει το νουκλεϊκό οξύ, να εξαλείψει το ένζυμο αποσύνθεσης νουκλεϊκού οξέος και να αποτρέψει τον ιό.Το RNA αποικοδομείται.

Διάλυμα δειγματοληψίας ιού που παρασκευάζεται με βάση διάλυμα λύσης εκχύλισης νουκλεϊκού οξέος.Τα κύρια συστατικά είναι ισορροπημένα άλατα, χηλικός παράγοντας αιθυλενοδιαμινοτετραοξικού οξέος, άλας γουανιδίνης (ισοθειοκυανική γουανιδίνη, υδροχλωρική γουανιδίνη, κ.λπ.), ανιονικό επιφανειοδραστικό (δωδεκάνιο) Θειικό νάτριο), κατιονικό επιφανειοδραστικό (τετραδεκυλ τριμεθυλεστέρας-8, διχλωροθινοξυλο-αμμώνιο, διχλωροθυλοξυ-αμμώνιο, διχλωροθυλοξίνη). ase K και άλλα πολλά ή περισσότερα συστατικά.Επί του παρόντος, υπάρχουν πολλοί τύποι κιτ εκχύλισης νουκλεϊκού οξέος και χρησιμοποιούνται διαφορετικά αντιδραστήρια εκχύλισης και καθαρισμού νουκλεϊκών οξέων.Ακόμη και αν χρησιμοποιείται το ίδιο αντιδραστήριο εκχύλισης και καθαρισμού νουκλεϊκού οξέος, οι διαδικασίες εκχύλισης κάθε κιτ είναι διαφορετικές.

Επί του παρόντος, τα προϊόντα κιτ ανίχνευσης νουκλεϊκών οξέων που έχουν εγκριθεί από την Εθνική Υπηρεσία Ιατρικών Προϊόντων επιλέγονται με βάση τα γονίδια ORF1ab, E και N στο γονιδίωμα SARS-CoV-2.Οι αρχές ανίχνευσης διαφορετικών προϊόντων είναι βασικά οι ίδιες, αλλά οι εκκινητές και τα σχέδια ανιχνευτών τους είναι διαφορετικά.Υπάρχουν τμήματα μονού στόχου (ORF1ab), τμήματα διπλού στόχου (ORF1ab, N ή E) και τμήματα τριών στόχων (ORF1ab, N και E).Η διαφορά μεταξύ ανίχνευσης και ερμηνείας, εκχύλισης νουκλεϊκού οξέος και συστήματος αντίδρασης φθορισμού RT-PCR σε πραγματικό χρόνο θα πρέπει να αναφέρεται στις σχετικές οδηγίες κιτ και συνιστάται στους χρήστες να ακολουθούν αυστηρά τη μέθοδο ερμηνείας που καθορίζεται στις οδηγίες του κιτ για ερμηνεία.Οι κοινές περιοχές, οι εκκινητές και οι αλληλουχίες ανιχνευτών που ενισχύθηκαν με φθορίζουσα RT-PCR πραγματικού χρόνου φαίνονται στο P3.

P3 Η θέση του στόχου του αμπλικονίου SARS-CoV-2 στο γονιδίωμα και η αλληλουχία των εκκινητών και των ανιχνευτών

Ερμηνεία των αποτελεσμάτων του προσδιορισμού νουκλεϊκού οξέος SARS-CoV-2 (Real-TIM fluorescent RT-PCR)

Το «Σχέδιο Πρόληψης και Ελέγχου Πνευμονίας για Λοίμωξη SARS-CoV-2 (Δεύτερη Έκδοση)» διευκρίνισε για πρώτη φορά τα κριτήρια για την κρίση των αποτελεσμάτων της ενίσχυσης ενός γονιδίου:

1. Κανένα Ct ή Ct≥40 δεν είναι αρνητικό.

2. Το Ct<37 είναι θετικό.

3. Η τιμή Ct 37-40 είναι η περιοχή κλίμακας του γκρι.Συνιστάται η επανάληψη του πειράματος.Εάν το αποτέλεσμα της επανάληψης του Ct<40 και της καμπύλης ενίσχυσης έχει εμφανείς κορυφές, το δείγμα κρίνεται ως θετικό, διαφορετικά είναι αρνητικό.

Η τρίτη έκδοση του οδηγού και η τέταρτη έκδοση του οδηγού συνέχισαν τα παραπάνω κριτήρια.Ωστόσο, λόγω των διαφορετικών στόχων που χρησιμοποιούνται στα εμπορικά κιτ, η προαναφερθείσα 3η έκδοση του οδηγού δεν έδωσε τα κριτήρια για τον προσδιορισμό του συνδυασμού των στόχων, δίνοντας έμφαση στις οδηγίες που παρέχονται από τον κατασκευαστή.Ξεκινώντας από την πέμπτη έκδοση των κατευθυντήριων γραμμών, δύο στόχοι έχουν αποσαφηνιστεί, ειδικά τα κριτήρια κρίσης για έναν μόνο στόχο που είναι δύσκολο να κριθεί.Δηλαδή, εάν το εργαστήριο θέλει να επιβεβαιώσει ότι ένα κρούσμα είναι θετικό για ανίχνευση νουκλεϊκού οξέος SARS-CoV-2, πρέπει να πληρούνται τα ακόλουθα 1 από 2 προϋποθέσεις:

(1) Δύο στόχοι του SARS-CoV-2 (ORF1ab, N) στο ίδιο δείγμα ελέγχονται θετικοί με φθορίζουσα RT-PCR σε πραγματικό χρόνο.Εάν ένας μόνο στόχος είναι θετικός, απαιτείται εκ νέου δειγματοληψία και επανέλεγχος.Εάν τα αποτελέσματα της δοκιμής είναι Εάν ο μοναδικός στόχος είναι ακόμα θετικός, κρίνεται ως θετικός.

(2) Δύο δείγματα φθορίζουσας RT-PCR πραγματικού χρόνου έδειξαν έναν μόνο στόχο θετικό ταυτόχρονα ή δύο δείγματα του ίδιου τύπου έδειξαν ένα μόνο στόχο θετικό αποτέλεσμα δοκιμής, το οποίο μπορεί να κριθεί ως θετικό.Ωστόσο, οι οδηγίες τονίζουν επίσης ότι τα αρνητικά αποτελέσματα των δοκιμών νουκλεϊκού οξέος δεν μπορούν να αποκλείσουν τη μόλυνση από SARS-CoV-2.Παράγοντες που μπορεί να προκαλέσουν ψευδώς αρνητικά πρέπει να αποκλειστούν, όπως η κακή ποιότητα του δείγματος (αναπνευστικά δείγματα από στοματοφάρυγγα και άλλα μέρη), η συλλογή δειγμάτων πολύ νωρίς ή πολύ αργά, τα δείγματα δεν αποθηκεύτηκαν, δεν μεταφέρθηκαν και δεν υποβλήθηκαν σε επεξεργασία σωστά και η ίδια η τεχνολογία είχε προβλήματα (παραλλαγή ιού, αναστολή PCR) κ.λπ.

Αιτίες ψευδώς αρνητικών στην ανίχνευση SARS-CoV-2

Η έννοια του "ψευδώς αρνητικού" στις δοκιμές νουκλεϊκού οξέος που αφορά αυτήν τη στιγμή, συχνά αναφέρεται σε "ψευδώς αρνητικά" στα οποία τα αποτελέσματα των τεστ νουκλεϊκού οξέος δεν συνάδουν με τις κλινικές εκδηλώσεις, δηλαδή τα κλινικά συμπτώματα και τα αποτελέσματα απεικόνισης είναι πολύ ύποπτα για COVID-19, αλλά τα τεστ νουκλεϊκού οξέος είναι πάντα "αρνητικά" πολλές φορές.Το Κλινικό Εργαστηριακό Κέντρο της Εθνικής Επιτροπής Υγείας εξήγησε το «ψευδώς αρνητικό» τεστ SARS-CoV-2.

(1) Υπάρχει μια ορισμένη ποσότητα ιού στα κύτταρα του μολυσμένου ατόμου.Τα υπάρχοντα δεδομένα δείχνουν ότι μετά τη μόλυνση του οργανισμού από τον ιό, ο ιός εισέρχεται στο λαιμό μέσω της μύτης και του στόματος, στη συνέχεια στην τραχεία και τους βρόγχους και στη συνέχεια φτάνει στις κυψελίδες.Το μολυσμένο άτομο θα βιώσει την περίοδο επώασης, ήπια συμπτώματα και στη συνέχεια τη διαδικασία σοβαρών συμπτωμάτων και διαφορετικά στάδια της νόσου.Και η ποσότητα του ιού που υπάρχει σε διαφορετικά μέρη του σώματος είναι διαφορετική.

Όσον αφορά το ιικό φορτίο των τύπων κυττάρων, κυψελιδικά επιθηλιακά κύτταρα (κατώτερη αναπνευστική οδός)> επιθηλιακά κύτταρα αεραγωγών (άνω αναπνευστική οδός)> ινοβλάστες, ενδοθηλιακά κύτταρα και μακροφάγα κ.λπ.από τον τύπο του δείγματος, υγρό κυψελιδικής πλύσης (το πιο εξαιρετικό)>πτύελα βαθύ βήχα>ρινοφαρυγγικό επίχρισμα>στοματοφαρυγγικό επίχρισμα>αίμα.Επιπλέον, ο ιός μπορεί να ανιχνευθεί και στα κόπρανα.Ωστόσο, λαμβάνοντας υπόψη την ευκολία της επέμβασης και την αποδοχή των ασθενών, η συνήθως χρησιμοποιούμενη σειρά κλινικού δείγματος είναι στοματοφαρυγγικό επίχρισμα> ρινοφαρυγγικό επίχρισμα> βρογχικό υγρό πλύσης (σύνθετη επέμβαση) και βαθιά πτύελα (συνήθως ξηρός βήχας, δύσκολο να ληφθούν).

Επομένως, η ποσότητα του ιού στα κύτταρα του στοματοφάρυγγα ή του ρινοφάρυγγα ορισμένων ασθενών είναι μικρή ή εξαιρετικά χαμηλή.Εάν ληφθούν μόνο δείγματα του στοματοφάρυγγα ή του ρινοφάρυγγα για εξέταση, το ιικό νουκλεϊκό οξύ δεν θα ανιχνευθεί.

(2) Δεν συλλέχθηκαν κύτταρα που να περιέχουν ιό κατά τη συλλογή του δείγματος ή το ιικό νουκλεϊκό οξύ δεν διατηρήθηκε αποτελεσματικά.

[① Ακατάλληλη θέση συλλογής, για παράδειγμα, όταν συλλέγονται στοματοφαρυγγικά επιχρίσματα, το βάθος συλλογής δεν είναι αρκετό, τα συλλεγμένα ρινοφαρυγγικά επιχρίσματα δεν συλλέγονται βαθιά στη ρινική κοιλότητα, κ.λπ. Τα περισσότερα από τα κύτταρα που συλλέγονται μπορεί να είναι κύτταρα χωρίς ιούς.

② Τα επιχρίσματα δειγματοληψίας χρησιμοποιούνται λανθασμένα.Για παράδειγμα, συνθετικές ίνες όπως ίνες πολυαιθυλενίου, πολυεστερικές ίνες και ίνες πολυπροπυλενίου συνιστώνται για το υλικό της κεφαλής μπατονέτας.Οι φυσικές ίνες όπως το βαμβάκι χρησιμοποιούνται στην πραγματική λειτουργία (ισχυρή προσρόφηση πρωτεΐνης και δεν είναι εύκολο να ξεπλυθεί) και ίνες νάιλον (κακή απορρόφηση νερού, που οδηγεί σε ανεπαρκή όγκο δειγματοληψίας).

③Λανθασμένη χρήση σωλήνων αποθήκευσης ιών, όπως κακή χρήση πλαστικών σωλήνων αποθήκευσης πολυπροπυλενίου ή πολυαιθυλενίου που απορροφώνται εύκολα νουκλεϊκά οξέα (DNA/RNA), με αποτέλεσμα τη μείωση της συγκέντρωσης νουκλεϊκού οξέος στο διάλυμα αποθήκευσης.Στην πράξη, συνιστάται η χρήση πλαστικού πολυμερούς πολυαιθυλενίου-προπυλενίου και ορισμένα ειδικά επεξεργασμένα πλαστικά δοχεία πολυπροπυλενίου για την αποθήκευση ιικών νουκλεϊκών οξέων.]

[① Ακατάλληλη θέση συλλογής, για παράδειγμα, όταν συλλέγονται στοματοφαρυγγικά επιχρίσματα, το βάθος συλλογής δεν είναι αρκετό, τα συλλεγμένα ρινοφαρυγγικά επιχρίσματα δεν συλλέγονται βαθιά στη ρινική κοιλότητα, κ.λπ. Τα περισσότερα από τα κύτταρα που συλλέγονται μπορεί να είναι κύτταρα χωρίς ιούς.

② Τα επιχρίσματα δειγματοληψίας χρησιμοποιούνται λανθασμένα.Για παράδειγμα, συνθετικές ίνες όπως ίνες πολυαιθυλενίου, πολυεστερικές ίνες και ίνες πολυπροπυλενίου συνιστώνται για το υλικό της κεφαλής μπατονέτας.Οι φυσικές ίνες όπως το βαμβάκι χρησιμοποιούνται στην πραγματική λειτουργία (ισχυρή προσρόφηση πρωτεΐνης και δεν είναι εύκολο να ξεπλυθεί) και ίνες νάιλον (κακή απορρόφηση νερού, που οδηγεί σε ανεπαρκή όγκο δειγματοληψίας).

③Λανθασμένη χρήση σωλήνων αποθήκευσης ιών, όπως κακή χρήση πλαστικών σωλήνων αποθήκευσης πολυπροπυλενίου ή πολυαιθυλενίου που απορροφώνται εύκολα νουκλεϊκά οξέα (DNA/RNA), με αποτέλεσμα τη μείωση της συγκέντρωσης νουκλεϊκού οξέος στο διάλυμα αποθήκευσης.Στην πράξη, συνιστάται η χρήση πλαστικού πολυμερούς πολυαιθυλενίου-προπυλενίου και ορισμένα ειδικά επεξεργασμένα πλαστικά δοχεία πολυπροπυλενίου για την αποθήκευση ιικών νουκλεϊκών οξέων.]

(4) Η λειτουργία του κλινικού εργαστηρίου δεν είναι τυποποιημένη.Οι συνθήκες μεταφοράς και αποθήκευσης δειγμάτων, η τυποποιημένη λειτουργία των κλινικών εργαστηρίων, η ερμηνεία των αποτελεσμάτων και ο ποιοτικός έλεγχος είναι οι βασικοί παράγοντες για τη διασφάλιση της ακρίβειας και της αξιοπιστίας των αποτελεσμάτων των δοκιμών.Σύμφωνα με τα αποτελέσματα της εξωτερικής αξιολόγησης ποιότητας που διενεργήθηκε από το Κλινικό Εργαστηριακό Κέντρο της Εθνικής Επιτροπής Υγείας στις 16-24 Μαρτίου 2020, από τα 844 εργαστήρια που έλαβαν έγκυρα αποτελέσματα, 701 (83,1%) ήταν πιστοποιημένα και 143 (16,9%) όχι.Τα πιστοποιημένα, οι συνολικές συνθήκες εργαστηριακών δοκιμών είναι καλές, αλλά διαφορετικά εργαστήρια εξακολουθούν να έχουν διαφορές στην ικανότητα λειτουργίας του προσωπικού, στην ικανότητα θετικής ερμηνείας του δείγματος ενός στόχου και στον ποιοτικό έλεγχο.

Πώς να μειώσετε το ψευδώς αρνητικό της ανίχνευσης νουκλεϊκού οξέος SARS-CoV-2;

Η μείωση των ψευδώς αρνητικών στην ανίχνευση νουκλεϊκού οξέος θα πρέπει να βελτιστοποιηθεί από τις τέσσερις πτυχές της παραγωγής ψευδώς αρνητικών.

(1)Υπάρχει μια ορισμένη ποσότητα ιού στα κύτταρα του μολυσμένου ατόμου.Η συγκέντρωση του ιού σε διαφορετικά μέρη του σώματος των ύποπτων μολυσμένων ατόμων θα είναι διαφορετική σε διαφορετικές χρονικές στιγμές.Εάν δεν υπάρχει φάρυγγας, μπορεί να βρίσκεται σε υγρό βρογχικής πλύσης ή κόπρανα.Εάν μπορούν να συλλεχθούν πολλαπλοί τύποι δειγμάτων ταυτόχρονα ή σε διαφορετικά στάδια εξέλιξης της νόσου για έλεγχο, θα βοηθήσει στην αποφυγή ψευδών αρνητικών.

(2) Τα κύτταρα που περιέχουν ιό θα πρέπει να συλλέγονται κατά τη συλλογή του δείγματος.Αυτό το πρόβλημα μπορεί να λυθεί σε μεγάλο βαθμό με την ενίσχυση της εκπαίδευσης των συλλεκτών δειγμάτων.

(3) Αξιόπιστα αντιδραστήρια IVD.Με τη διεξαγωγή έρευνας για την αξιολόγηση της απόδοσης ανίχνευσης των αντιδραστηρίων σε εθνικό επίπεδο και τη συζήτηση των υφιστάμενων προβλημάτων, μπορεί να βελτιωθεί περαιτέρω η αποτελεσματικότητα ανίχνευσης των αντιδραστηρίων και να βελτιωθεί η ευαισθησία της ανάλυσης.

(4) Τυποποιημένη λειτουργία κλινικών εργαστηρίων.Με την ενίσχυση της εκπαίδευσης του εργαστηριακού προσωπικού, τη συνεχή βελτίωση του συστήματος διαχείρισης ποιότητας του εργαστηρίου, την εξασφάλιση εύλογων κατατμήσεων και τη βελτίωση της ικανότητας ανίχνευσης του προσωπικού, είναι δυνατό να μειωθούν τα ψευδώς αρνητικά που οφείλονται σε ακατάλληλες εργαστηριακές λειτουργίες.

Λόγοι για τη θετική επανάληψη του τεστ νουκλεϊκού οξέος SARS-CoV-2 σε ασθενείς που έχουν αναρρώσει και έχουν εξέλθει

Το "Σχέδιο Διάγνωσης και Θεραπείας Covid-19 (Δοκιμαστική Έβδομη Έκδοση)" ορίζει σαφώς ότι ένα από τα κριτήρια για τους ασθενείς με CovID-19 που πρέπει να θεραπευτούν και να εκφορτωθούν από το νοσοκομείο είναι ότι δύο διαδοχικοί δείγματα αναπνευστικής οδού έχουν αρνητική δοκιμή νουκλεϊκού οξέος (τουλάχιστον 24 ώρες)

(1) Ο SARS-CoV-2 είναι ένας νέος ιός.Είναι απαραίτητο να κατανοήσουμε περαιτέρω τον παθογόνο μηχανισμό της, την πλήρη εικόνα της νόσου που προκαλείται και τα χαρακτηριστικά της πορείας της νόσου.Ως εκ τούτου, από τη μία πλευρά, είναι απαραίτητο να ενισχυθεί η διαχείριση των ασθενών που εξήλθαν και να διεξαχθεί ιατρική παρακολούθηση 14 ημερών.Πραγματοποιήστε παρακολούθηση, παρακολούθηση της υγείας και καθοδήγηση υγείας για να εμβαθύνετε την κατανόηση της όλης διαδικασίας εμφάνισης, ανάπτυξης και έκβασης της νόσου.

(2) Ο ασθενής μπορεί να μολυνθεί ξανά από τον ιό.Ο ακαδημαϊκός Zhong Nanshan είπε: Επειδή οι θεραπευμένοι ασθενείς έχουν αντισώματα, ο SARS-CoV-2 μπορεί να εξαλειφθεί με αντισώματα όταν εισβάλουν ξανά.Υπάρχουν πολλοί λόγοι που μπορεί να είναι η αιτία του αναρρωμένου ασθενούς ή να σχετίζονται με τη μετάλλαξη του ιού ή ακόμα και με την αιτία εργαστηριακού ελέγχου.Εάν είναι ο ίδιος ο ιός, η μετάλλαξη SARS-CoV-2 μπορεί να κάνει το αντίσωμα που παράγεται από τον αναρρωμένο ασθενή να είναι αναποτελεσματικό έναντι του μεταλλαγμένου ιού.Εάν ο ασθενής μολυνθεί ξανά από τον μεταλλαγμένο ιό, το τεστ νουκλεϊκού οξέος μπορεί να είναι και πάλι θετικό.

(3) Όσον αφορά τις εργαστηριακές μεθόδους δοκιμών, κάθε μέθοδος δοκιμής έχει τους περιορισμούς της.Η ανίχνευση νουκλεϊκού οξέος SARS-CoV-2 οφείλεται στην επιλογή της γονιδιακής αλληλουχίας, στη σύνθεση των αντιδραστηρίων, στην ευαισθησία της μεθόδου και σε άλλους λόγους, με αποτέλεσμα τα υπάρχοντα κιτ να έχουν τα δικά τους χαμηλότερα όρια ανίχνευσης.Μετά τη θεραπεία του ασθενούς, ο ιός στο σώμα μειώνεται.Όταν το ιικό φορτίο στο προς δοκιμή δείγμα είναι κάτω από το κατώτερο όριο ανίχνευσης, θα εμφανιστεί ένα «αρνητικό» αποτέλεσμα.Ωστόσο, αυτό το αποτέλεσμα δεν σημαίνει ότι ο ιός στο σώμα έχει εξαφανιστεί εντελώς.Ο ιός μπορεί να είναι μετά τη διακοπή της θεραπείας.Resurgence», συνεχίστε την αντιγραφή.Επομένως, συνιστάται η επανεξέταση μία φορά την εβδομάδα εντός 2 έως 4 εβδομάδων μετά την έξοδο.

(4) Το νουκλεϊκό οξύ είναι το γενετικό υλικό του ιού.Ο ιός σκοτώνεται αφού ο ασθενής υποβληθεί σε αντιική θεραπεία, αλλά τα εναπομείναντα θραύσματα ιικού RNA εξακολουθούν να διατηρούνται στο ανθρώπινο σώμα και δεν αποβάλλονται πλήρως από το σώμα.Μερικές φορές, υπό ορισμένες συνθήκες, μπορεί να διατηρηθεί περισσότερο.Για μεγάλο χρονικό διάστημα, και αυτή τη στιγμή η δοκιμή νουκλεϊκού οξέος θα είναι «παροδική» θετική.Με την παράταση του χρόνου ανάρρωσης του ασθενούς, αφού τα υπολειμματικά θραύσματα RNA στο σώμα εξαντληθούν σταδιακά, το αποτέλεσμα της δοκιμής νουκλεϊκού οξέος μπορεί να γίνει αρνητικό.

(5) Το αποτέλεσμα της δοκιμής νουκλεϊκού οξέος του SARS-CoV-2 αποδεικνύει μόνο την παρουσία ή την απουσία ιικού RNA και δεν μπορεί να αποδείξει τη δραστηριότητα του ιού και εάν ο ιός είναι μεταδοτικός.Είναι απαραίτητο να αποδειχθεί εάν ένας ασθενής που έχει ξανά θετικό τεστ νουκλεϊκού οξέος θα γίνει ξανά πηγή μόλυνσης.Είναι απαραίτητο να πραγματοποιηθεί καλλιέργεια ιού σε κλινικά δείγματα και να καλλιεργηθεί ένας «ζωντανός» ιός για να αποδειχθεί ότι είναι μολυσματικός.

Περίληψη

Συνοπτικά, τα ψευδώς αρνητικά τεστ νουκλεϊκού οξέος SARS-CoV-2, τα θετικά επανάληψης του τεστ και άλλες καταστάσεις που δεν συνάδουν με τις κλινικές εκδηλώσεις δεν μπορούν να αποφευχθούν πλήρως.Κατά τον πραγματικό προσυμπτωματικό έλεγχο και τον έλεγχο, συνιστάται ο συνδυασμός κλινικών συμπτωμάτων, απεικονιστικών εξετάσεων (CT) και πειραμάτων Αποτελέσματα εργαστηριακών δοκιμών (δοκιμή νουκλεϊκού οξέος + δοκιμή αντισωμάτων ειδικού για τον ιό) για ολοκληρωμένη διάγνωση, ώστε να αποφευχθεί η μη διάγνωση και η λανθασμένη διάγνωση.Εάν τα αποτελέσματα των δοκιμών διαπιστωθεί ότι δεν συνάδουν προφανώς με τις κλινικές εκδηλώσεις, συνιστάται η διεξαγωγή ολοκληρωμένης ανάλυσης ολόκληρου του συνδέσμου δοκιμής (σύνδεσμοι συλλογής δειγμάτων, κυκλοφορία και επεξεργασία) για να αποκλειστεί η πρώιμη λοίμωξη από τον ιό SARS-CoV-2, η υποτροπιάζουσα λοίμωξη ή σε συνδυασμό με άλλες λοιμώξεις από ιούς του αναπνευστικού κ.λπ.Εάν οι συνθήκες το επιτρέπουν, συνιστάται η συλλογή πιο ευαίσθητων δειγμάτων όπως πτυέλων ή υγρού κυψελιδικής πλύσης για επανεξέταση.

Σχετικά προϊόντα:

Κιτ ανίχνευσης νουκλεϊκών οξέων SARS-CoV-2 (Μέθοδος ανιχνευτή φθορισμού πολλαπλής PCR)