Εισαγωγή:

Το RNA, επιστημονική ονομασία ριβονουκλεϊκό οξύ, η συντομογραφία του προέρχεται από το RiboNucleic Acid, είναι ένας τύπος νουκλεϊκού οξέος που σχηματίζεται από τη σύνδεση τουλάχιστον δεκάδων ριβονουκλεοτιδίων μέσω φωσφοδιεστερικών δεσμών.

Η αρχή της εξερεύνησης του RNA είναι η εξαγωγή ολικού RNA χωρίς ρύπανση και η βασική αρχή της εξαγωγής RNA μπορεί να συνοψιστεί χονδρικά ως εξής:

1. Διατάραξε πρώτα τα κύτταρα

2. Στη συνέχεια αφαιρέστε τις μακρομοριακές ακαθαρσίες (πρωτεΐνες, λιπίδια, DNA κ.λπ.)

3. Τέλος, το RNA κατακρημνίζεται ενώ απομακρύνονται τα άλατα και οι οργανικοί διαλύτες και ο περαιτέρω καθαρισμός του RNA

Παρελθόν και παρόν της μεθόδου εξαγωγής

Η πρώτη γενιά μεθόδου εκχύλισης RNA είναι η μέθοδος κατακρήμνισης TRIzol (τα αντιδραστήρια που χρησιμοποιούνται περιλαμβάνουν ισοθειοκυανική γουανιδίνη, φαινόλη, χλωροφόρμιο, κ.λπ.) που εφευρέθηκε από έναν παππού ονόματι Piotr Chomczynski και τη γιαγιά Nicoletta Sacchi, επειδή αυτή η εφεύρεση επιτρέπει την εκχύλιση RNA Γρήγορη και εύκολη, από τότε ξεκίνησε η έρευνα του RNA.

Αργότερα, ο παππούς πούλησε αυτό το δίπλωμα ευρεσιτεχνίας στην Invitrogen και η Invitrogen προώθησε αυτή τη μέθοδο στον κόσμο και έγινε μια ευρέως χρησιμοποιούμενη μέθοδος.

Αργότερα, η Invitrogen εξαγοράστηκε από τη Thermo!

Αντιπροσωπευτικό προϊόν: Αντιδραστήριο TRIZol της Invitrogen

Ωστόσο, η μέθοδος καθίζησης TRIzol απαιτεί πολλαπλή καθίζηση και εκχύλιση RNA και τα αντιδραστήρια που χρησιμοποιούνται είναι τοξικά και χρειάζονται πολύ χρόνο για να λειτουργήσουν.

Ως εκ τούτου, δημιουργήθηκε η μέθοδος καθαρισμού στήλης-ενζύμου δεύτερης γενιάς, χρησιμοποιώντας μεμβράνη πυριτικής πηκτής ως ειδικό υλικό προσρόφησης νουκλεϊκού οξέος για να μεγιστοποιηθεί η ανάκτηση του RNA στο δείγμα ενώ αφαιρούνται άλλες ακαθαρσίες.

Η μέθοδος δεύτερης γενιάς απλοποιεί τη λειτουργία με βάση τη σταθερή απόδοση, μειώνει τον παράγοντα κινδύνου και βελτιώνει την αποτελεσματικότητα της εξαγωγής RNA.

Αντιπροσωπευτικά προϊόντα: QIAGEN RNeasy και τα περισσότερα εγχώρια προϊόντα

Ωστόσο, τόσο η μέθοδος πρώτης όσο και δεύτερης γενιάς απαιτούν τη χρήση DNase για την αφαίρεση της μόλυνσης του DNA, κάτι που προκαλεί κάποια ταλαιπωρία στα επόμενα πειράματα κατάντη.Η υπολειπόμενη DNase θα μειώσει την αποτελεσματικότητα της αντίστροφης μεταγραφής και θα μειώσει τη σύνθεση του πρώτου κλώνου cDNA, επηρεάζοντας έτσι την ακρίβεια των αποτελεσμάτων.

Επομένως, η μέθοδος εξαγωγής τρίτης γενιάς βελτιστοποιείται με βάση τη δεύτερη γενιά.Το πείραμα δεν χρειάζεται να προσθέσει κανένα ένζυμο και το RNA μπορεί να ληφθεί εύκολα μόνο με δύο στήλες.

Στήλη 1: Στήλη καθαρισμού DNA για καθαρισμό του DNA

Στήλη 2: Στήλη μόνο για RNA απορροφά και ανακτά ειδικά το RNA

Μια τόσο απλή λειτουργία όχι μόνο εξοικονομεί χρόνο, αλλά διευκολύνει και τη λειτουργία των κατάντη πειραμάτων!

Αντιπροσωπευτικά προϊόντα: QIAGEN RNeasy Plus καιForegeneΠροϊόντα της σειράς καθαρισμού RNA

(RNeasy Plus)

(του ForegeneΚιτ απομόνωσης ολικού RNA φυτού)

να σου πω ήσυχα!Το κιτ RNA της Foregene παρουσιάζει επίσης μια εξαιρετικά εύχρηστη Γόμα RNase, η οποία μπορεί να αφαιρέσει πλήρως 400μg RNase στη στερεά επιφάνεια σε 1 λεπτό, χωρίς να προσθέσει τοξικές ουσίες στον ανθρώπινο οργανισμό!

Εικ1: Διάγραμμα σύγκρισης λειτουργικών διαδικασιών

Τα προϊόντα της Foregene μπορούν να ολοκληρώσουν την εξαγωγή RNA σε δύο μόνο τραγούδια, μην κάνετε τους άλλους να ζηλεύουν την πρόοδο του πειράματός σας!

Εικ2:Eπειραματικά αποτελέσματα συγκριτικό διάγραμμα

Η πρώτη γενιά (1: TRIzol)

Η δεύτερη γενιά (2: RNeasy της QIAGEN)

Η τρίτη γενιά (3: QIAGEN's RNeasy plus, 4: Foregene)

Εικ3: Γράφημα qPCR (γραφική παράσταση καμπύλης ενίσχυσης)

Η πρώτη γενιά (πράσινο σημαίνει TRIzol -, κόκκινο σημαίνει TRIzol +)

Η δεύτερη γενιά (το μπλε του ουρανού σημαίνει QIAGEN RNeasy-, το κόκκινο σημαίνει QIAGEN RNeasy +)

Η τρίτη γενιά (μπλε σημαίνει QIAGEN RNeasy plus, πράσινο σημαίνει Foregene)

(Σημείωση: Το γράφημα qPCR "-" υποδεικνύει ότι δεν έχει προστεθεί DNase και δεν έχει αφαιρεθεί μόλυνση DNA. Επομένως, η CT είναι υψηλότερη και το αποτέλεσμα δεν είναι ακριβές. "+" υποδεικνύει ότι έχει προστεθεί DNase και η μόλυνση DNA έχει αφαιρεθεί, το αποτέλεσμα είναι ακριβές)

Κάθε τεχνική αναβάθμιση σημαίνει ότι η λειτουργία του πειράματος εξελίσσεται προς μια απλούστερη και πιο φιλική προς τον χρήστη κατεύθυνση.

Η Foregene στοχεύει να βοηθήσει περισσότερους επιστημονικούς ερευνητές να εξοικονομήσουν πειραματικό χρόνο και κόστος, να αποκτήσουν πειραματικά αποτελέσματα υψηλής ποιότητας και από κοινού να δημιουργήσουν πιο πολύτιμα επιστημονικά ερευνητικά επιτεύγματα.