Η ακόλουθη ανάλυση των πιθανών προβλημάτων στοΠαρειάςμάκτρο/ΣΕΣ card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

Η στήλη καθαρισμού είναι βουλωμένη

Σε αυτό το κιτ, στη λειτουργία εκχύλισης γονιδιωματικού DNA, η στήλη καθαρισμού προσροφάται απευθείας στο μίγμα ενζυματικής λύσης του δείγματος χωρίς στάδιο φυγοκέντρησης και η στήλη καθαρισμού μπορεί να αποκλειστεί λόγω ατελούς ενζυμοποίησης και υψηλού ιξώδους του δείγματος.

Οι ακόλουθες πιθανές αιτίες είναι οι εξής:

1. Ατελής ενζυματική πέψη δειγμάτων ιστού.

Σύσταση: Ο χρόνος επεξεργασίας του δείγματος της Foregene Protease μπορεί να παραταθεί κατάλληλα ή το υπερκείμενο μπορεί να ληφθεί μετά από φυγοκέντρηση στις 12.000 rpm (~13.400× ζ) για 5 λεπτά.

2. Υπερβολική χρήση δειγμάτων ιστών ή μεγάλων ιστών.

Σύσταση: Καλό είναι να μην υπερβαίνετε το 1Παρειάς μπατονέτα στο δείγμα.εάν το δείγμα είναι πολύ μεγάλο, αυξήστε τη δόση του ρυθμιστικού διαλύματος ST1, της πρωτεάσης Foregene, του ρυθμιστικού διαλύματος ST2 ανάλογα.

3. Το ιξώδες του δείγματος είναι πολύ υψηλό.

Σύσταση: Τα δείγματα μπορούν να αραιωθούν κατάλληλα με 10 mM Tris-HCl πριν από την εκχύλιση του γονιδιωματικού DNA.

4. Θραύσματα της κάρτας αίματος έχουν πιπιλιστεί.

Σύσταση: Ο χρόνος παροδικής φυγοκέντρησης του βήματος 6 της γονιδιωματικής εκχύλισης κηλίδων αίματος (Κάρτα FTA) μπορεί να παραταθεί κατάλληλα.

Χαμηλή απόδοση ή καθόλου DNA

Υπάρχει συχνά μια ποικιλία παραγόντων που επηρεάζουν την απόδοση του γονιδιωματικού DNA, συμπεριλαμβανομένης της προέλευσης του δείγματος, των συνθηκών αποθήκευσης του δείγματος, της προετοιμασίας του δείγματος, του χειρισμού κ.λπ.

Το γονιδιωματικό DNA δεν μπορεί να ληφθεί κατά την εκχύλιση

Οι πιθανές αιτίες είναι οι εξής:

1. Η ακατάλληλη διατήρηση των δειγμάτων ή η αποθήκευση για πολύ μεγάλο χρονικό διάστημα οδηγεί σε αποικοδόμηση του γονιδιωματικού DNA.

Σύσταση: Τα στοματικά επιχρίσματα θα πρέπει κατά προτίμηση να λαμβάνονται πρόσφατα και δεν συνιστάται η χρήση συντηρημένων επιχρισμάτων για εργασίες εξαγωγής γονιδιωματικού DNA.Τα δείγματα κηλίδων αίματος πρέπει να διασφαλίζουν ότι η ποιότητα είναι κατάλληλη και ο χρόνος αποθήκευσης δεν πρέπει να είναι πολύ μεγάλος.

2. Η πολύ μικρή χρήση ιστού μπορεί να οδηγήσει σε μη εξαγωγή του αντίστοιχου γονιδιωματικού DNA.

Σύσταση: Ακολουθήστε τοbuccal Οδηγίες δειγματοληψίας επιχρίσματος στον οδηγό λειτουργίας και σκουπίστε όσο το δυνατόν περισσότερες φορές, ώστε να μπορούν να συνδεθούν αρκετά κύτταρα στο στοματικό στειλεό για εξαγωγή γονιδιωματικού DNA.για την εξαγωγή δείγματος κηλίδων αίματος, η περιοχή κοπής κηλίδων αίματος μπορεί να αυξηθεί κατάλληλα.

3. Η Foregene Protease διατηρείται εσφαλμένα, με αποτέλεσμα τη μείωση της δραστηριότητάς της ή την αδρανοποίηση της.

Σύσταση: Επιβεβαιώστε τις συνθήκες αποθήκευσης τουτο Foregene Protease ή αντικαταστήστε την με μια νέα Foregene Protease για ενζυματική αντίδραση.

4. Η ακατάλληλη συντήρηση του κιτ ή ο χρόνος αποθήκευσης είναι πολύ μεγάλος, με αποτέλεσμα την αστοχία ορισμένων εξαρτημάτων του κιτ.

Σύσταση: Αγοράστε ένα νέοΠαρειάς μπατονέτα DNAαπομόνωση κιτ για σχετικές διαδικασίες.

5. Το ρυθμιστικό διάλυμα WB δεν προσθέτει απόλυτη αιθανόλη.

Σύσταση: Επιβεβαιώστε ότι το ρυθμιστικό διάλυμα WB προσθέτει τον σωστό όγκο απόλυτης αιθανόλης.

6. Το υγρό έκλουσης δεν προστίθεται σωστά στο φιλμ σιλικόνης.

Σύσταση: Προσθήκη 65°CΤο προθερμασμένο έκλουσμα πέφτει στη μέση της μεμβράνης σιλικόνης και αφήνεται σε θερμοκρασία δωματίου για 5 λεπτά για να αυξηθεί η απόδοση έκλουσης.

Lγονιδιωματικό DNA χαμηλής απόδοσης απομονωμένος

Οι ακόλουθες πιθανές αιτίες είναι οι εξής:

1. Η ακατάλληλη διατήρηση των δειγμάτων ή η αποθήκευση για πολύ μεγάλο χρονικό διάστημα οδηγεί σε αποικοδόμηση του γονιδιωματικού DNA.

Σύσταση: Τα στοματικά επιχρίσματα κατά προτίμηση λαμβάνονται πρόσφατα και τα διατηρημένα επιχρίσματα δεν θα πρέπει να χρησιμοποιούνται για την εξαγωγή γονιδιωματικού DNA.

2. Εάν η ποσότητα του δείγματος ιστού είναι πολύ μικρή, η περιεκτικότητα του εξαγόμενου γονιδιωματικού DNA θα είναι μικρότερη.

Σύσταση: Ακολουθήστε τις οδηγίες δειγματοληψίας επιχρίσματος από το στόμα στον οδηγό λειτουργίας, σκουπίζοντας όσο το δυνατόν περισσότερες φορές, ώστε να μπορούν να συνδεθούν αρκετά κύτταρα στο στοματικό στειλεό για εξαγωγή γονιδιωματικού DNA.

3. Η Foregene Protease διατηρείται εσφαλμένα, με αποτέλεσμα τη μείωση της δραστηριότητάς της ή την αδρανοποίηση της.

Σύσταση: Επιβεβαιώστε τις συνθήκες αποθήκευσης τουthe Foregene Protease ή αντικαταστήστε το με ένα νέο Foregene Protease για ενζυματική αντίδραση.

4. Προβλήματα εκλούσεως.

Σύσταση: Χρησιμοποιήστε ρυθμιστικό διάλυμα EB για έκλουση.εάν χρησιμοποιείτε ddH₂O ή άλλα διαλύματα έκλουσης, επιβεβαιώστε ότι το pH του εκλούσματος είναι μεταξύ 7,0-8,5.

5. Το έκλουσμα δεν προστίθεται σωστά στάγδην.

Σύσταση: Προσθέστε σταγόνες διαλύτη έκλουσης στη μέση της μεμβράνης σιλικόνης και αφήστε σε θερμοκρασία δωματίου για 5 λεπτά για να αυξήσετε την απόδοση έκλουσης.

6. Το υγρό έκλουσης συσσωρεύεται πολύ λίγο.

Σύσταση: Χρησιμοποιήστε το μέσο έκλουσης για την έκλουση γονιδιωματικού DNA όπως απαιτείται στις οδηγίες, τουλάχιστονόχι λιγότερο από 15μl.

Lω αγνότητα of γονιδιωματικό DNAαπομονωμένος

Η χαμηλή καθαρότητα του γονιδιωματικού DNA μπορεί να οδηγήσει σε αποτυχία ή μη ικανοποιητικά αποτελέσματα μεταγενέστερων πειραμάτων, όπως: τα ένζυμα δεν μπορούν να αποκοπούν, η PCR δεν μπορεί να πάρει το γονιδιακό θραύσμα που μας ενδιαφέρει κ.λπ.

Οι πιθανές αιτίες είναι οι εξής:

1. Ρύπανση από ετεροπρωτεΐνες, ρύπανση από RNA.

Ανάλυση: Η στήλη καθαρισμού δεν πλύθηκε χρησιμοποιώντας ρυθμιστικό PW.η στήλη καθαρισμού πλύσης ρυθμιστικού PW δεν πλύθηκε χρησιμοποιώντας τη σωστή φυγοκεντρική ταχύτητα.

Σύσταση: Βεβαιωθείτε ότι δεν υπάρχει καθίζηση στο υπερκείμενο πριν προσθέσετε αιθανόλη.φροντίστε να πλύνετε τη στήλη καθαρισμού σύμφωνα με τις οδηγίες και αυτό το βήμα δεν μπορεί να παραλειφθεί.

2. Ρύπανση από ακαθαρσίες ιόντων.

Ανάλυση: Η στήλη καθαρισμού πλύσης ρυθμιστικού διαλύματος WB παραλήφθηκε ή πλύθηκε μόνο μία φορά, με αποτέλεσμα την υπολειμματική ιοντική μόλυνση.

Σύσταση: Φροντίστε να πλύνετε το Buffer WB 2 φορές σύμφωνα με τις οδηγίες για να αφαιρέσετε τα υπολειμματικά ιόντα όσο το δυνατόν περισσότερο.

3. Μόλυνση από ένζυμα RNA.

Ανάλυση: Ξένες RNases προστέθηκαν στο ρυθμιστικό διάλυμα.Η λειτουργία πλύσης ρυθμιστικού PW ήταν εσφαλμένη, με αποτέλεσμα υπολείμματα RNase, που επηρεάζουν τις μεταγενέστερες πειραματικές λειτουργίες RNA, όπως η in vitro μεταγραφή.

Σύσταση: Νουκλεϊκό οξύ της σειράς Foregeneisolaτα κιτ ιονισμού μπορούν να αφαιρέσουν RNA χωρίς πρόσθετη προσθήκη RNase,έτσι Κιτ απομόνωσης καρτών στοματικής μπατονέτας/FTA Card DNAχρειάζεται't προσθήκη RNase;φροντίστε να ακολουθήσετε τις οδηγίες για τη στήλη καθαρισμού πλύσης Buffer PW και αυτό το βήμα δεν μπορεί να παραλειφθεί.

4. Υπόλειμμα αιθανόλης.

Ανάλυση: Το ρυθμιστικό διάλυμα WB δεν πραγματοποίησε φυγοκέντρηση με κενό σωλήνα μετά την έκπλυση της στήλης καθαρισμού.

Σύσταση: Εκτελέστε τη σωστή λειτουργία φυγοκέντρησης με άδειο σωλήνα σύμφωνα με τις οδηγίες.

5. Άλλη ρύπανση από ακαθαρσίες.

Ανάλυση: Τα αποθηκευμένα δείγματα ή τα ειδικά δείγματα δεν υποβάλλονται σε προεπεξεργασία.

Σύσταση: Προεπεξεργαστείτε προσεκτικά το δείγμα σύμφωνα με τις οδηγίες.