Καθιερώστε το SOP πειράματος PCR για να τυποποιήσετε τη συμπεριφορά του προσωπικού του πειράματος.
Ο πειραματιστής τηρεί αυστηρά τις διαδικασίες λειτουργίας και ελαχιστοποιεί τη ρύπανση με PCR που μπορεί να προκληθεί από ανθρώπινους παράγοντες ή αποτρέπει την εμφάνιση ρύπανσης.Επιπλέον, ο πειραματιστής θα πρέπει να έχει τις αντίστοιχες επαγγελματικές γνώσεις και δεξιότητες, συμπεριλαμβανομένης της επάρκειας στη λειτουργία σχετικού εξοπλισμού, της αποσαφήνισης ολόκληρης της διαδικασίας εργασίας, της γνώσης των μεθόδων θεραπείας της μόλυνσης και των μεθόδων ποιοτικού ελέγχου του εργαστηρίου και της ικανότητας να ερμηνεύει σωστά τα αποτελέσματα των δοκιμών.
Δημιουργήστε ένα τυπικό εργαστήριο PCR.
Το εργαστήριο PCR χωρίζεται σε τέσσερις τομείς κατ' αρχήν, δηλαδή περιοχή προετοιμασίας αντιδραστηρίου, περιοχή επεξεργασίας δείγματος, περιοχή ενίσχυσης και περιοχή ανάλυσης προϊόντος ενίσχυσης.Οι δύο πρώτες περιοχές είναι περιοχές προενίσχυσης και οι δύο τελευταίες περιοχές είναι περιοχές μετά την ενίσχυση.Η ζώνη προενίσχυσης και η ζώνη μετά την ενίσχυση πρέπει να διαχωρίζονται αυστηρά.Πειραματικά υλικά, αντιδραστήρια, χαρτί εγγραφής, στυλό, υλικά καθαρισμού κ.λπ., μπορούν να ρέουν μόνο από την περιοχή προενίσχυσης στην περιοχή μετά την ενίσχυση, δηλαδή από την περιοχή προετοιμασίας αντιδραστηρίου → περιοχή επεξεργασίας δείγματος → περιοχή ενίσχυσης → περιοχή ανάλυσης προϊόντος ενίσχυσης και δεν πρέπει να ρέουν προς τα πίσω .Η ροή αέρα στο εργαστήριο θα πρέπει επίσης να ρέει από την περιοχή προενίσχυσης στην περιοχή μετά την ενίσχυση και όχι να ρέει προς τα πίσω.Ο ιδανικός εργαστηριακός σχεδιασμός PCR φαίνεται παρακάτω:
Εικόνα A: Ιδανική λειτουργία εγκατάστασης εργαστηρίου PCR με αρνητική πίεση στο buffer room
Εικόνα Β: Ιδανική λειτουργία εγκατάστασης εργαστηρίου PCR με θετική πίεση στο buffer room
Τα διαγράμματα ρύθμισης εργαστηρίου PCR που δίνονται στο Σχήμα Α και στο Σχήμα Β θα πρέπει να είναι μια πιο ιδανική λειτουργία ρύθμισης και το εργαστήριο με συνθήκες μπορεί να ανατρέξει σε αυτήν τη λειτουργία για σχεδιασμό.Για τα συνηθισμένα εργαστήρια, συνιστάται ο διαχωρισμός της περιοχής ενίσχυσης PCR και της περιοχής ανάλυσης προϊόντος και το άνοιγμα του καλύμματος θα πρέπει να μειωθεί όσο το δυνατόν περισσότερο στην περιοχή προετοιμασίας του δείγματος και στην περιοχή ενίσχυσης PCR.Θυμηθείτε: Απαγορεύεται αυστηρά η μεταφορά προϊόντων και πειραματικών προμηθειών στην περιοχή ανάλυσης προϊόντος στην περιοχή προετοιμασίας του δείγματος και στην περιοχή ενίσχυσης PCR.
Εάν το εργαστήριο εκτελεί μόνο ανίχνευση και ταυτοποίηση PCR, συνιστάται η χρήση φθορίζουσας ποσοτικής PCR αντί της συμβατικής PCR.
Τα αποτελέσματα ποσοτικής ανίχνευσης PCR φθορισμού μπορούν να συλλεχθούν και να αναλυθούν με σήματα φθορισμού, επομένως δεν χρειάζεται να ανοίξετε το καπάκι για ηλεκτροφόρηση μετά την αντίδραση, γεγονός που αποφεύγει τη μόλυνση του προϊόντος PCR που προκαλείται από τη διαρροή των προϊόντων αντίδρασης για να σχηματιστούν αερολύματα.Εάν αυξήσετε τον αριθμό των ανοιγμάτων του καλύμματος κατά τη διάρκεια του βήματος φόρτωσης της ηλεκτροφόρησης γέλης, είναι πιθανό να προκύψει μόλυνση από αεροζόλ.Συνιστάται η προώθηση της εφαρμογής της ποσοτικής PCR και η σταδιακή αντικατάσταση της ποιοτικής PCR.
Το σύστημα μόλυνσης προϊόντων UNG anti-PCR χρησιμοποιείται για την αντίδραση PCR.
Το σύστημα χρησιμοποιεί dUTP αντί για dTTP.Μετά την αντίδραση PCR, όλα τα προϊόντα PCR (θραύσματα DNA) ενσωματώνονται με dUTP.στον επόμενο γύρο αντίδρασης PCR, το ένζυμο UNG που προστέθηκε στο σύστημα επωάζεται στους 37°C για 5 λεπτά πριν από την PCR, η οποία μπορεί να αποικοδομήσει ειδικά όλα τα θραύσματα DNA που περιέχουν dUTP και στη συνέχεια να πραγματοποιήσει αντίδραση PCR.Αυτό μπορεί να αφαιρέσει εντελώς τη μόλυνση από αεροζόλ που προκαλείται από προϊόντα PCR.Το αποτέλεσμα φαίνεται στο παρακάτω σχήμα:
Σημείωση: Για τη σειρά απευθείας PCR, μπορείτε να επιλέξετε τα προϊόντα της σειράς του συστήματος μόλυνσης προϊόντων anti-PCR της ForegeneΠροτείνω
Για εργαστήρια που διενεργούν μεγάλης κλίμακας δοκιμές γονότυπου, συνιστάται ανεπιφύλακτα η χρήση του συστήματος μόλυνσης προϊόντων UNG anti-PCR για τη δοκιμή αντιδραστηρίων εκτός από την κατασκευή λογικών εργαστηρίων.
Υπενθύμιση: Η χρήση αυτού του συστήματος δεν μπορεί να αφαιρέσει τη μόλυνση του προϊόντος PCR που έχει ήδη προκληθεί.Επομένως, το σύστημα UNG θα πρέπει να χρησιμοποιείται στην αρχή της σχετικής δοκιμής και το σύστημα UNG θα πρέπει να χρησιμοποιείται για ενίσχυση PCR, έτσι ώστε να αποφεύγεται η μόλυνση των προϊόντων PCR Ψευδώς θετικά.
Συνιστάται η χρήση του συστήματος Direct PCR-UNG της Foregene κατά τη διεξαγωγή δοκιμών μεγάλης κλίμακας, όπως:
Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG;
Plant Seed Direct PCR Kit-UNG;
Animal Tissue Direct PCR Kit-UNG;
Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG;
Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.
Αυτή η σειρά κιτ από την Foregeneμπορεί όχι μόνο να εκτελέσει ανίχνευση PCR γρήγορα και σε μεγάλη κλίμακα, αλλά και να αποτρέψει και να ελέγξει αποτελεσματικά τη μόλυνση του προϊόντος PCR.
Ώρα δημοσίευσης: Μαρ-19-2021
