Οδηγω

Το μακρύ μη κωδικοποιητικό RNA, το lncRNA είναι ένα μη κωδικοποιητικό RNA με μήκος μεγαλύτερο από 200 νουκλεοτίδια, γενικά μεταξύ 200-100000 nt.Το lncRNA ρυθμίζει την έκφραση γονιδίων σε επιγενετικά, μεταγραφικά και μεταμεταγραφικά επίπεδα και συμμετέχει στη σίγαση του χρωμοσώματος Χ, στην αποτύπωση γονιδιώματος και στην τροποποίηση της χρωματίνης, στην ενεργοποίηση μεταγραφής, στην μεταγραφική παρεμβολή, στην πυρηνική μεταφορά, στη ρύθμιση του κυτταρικού κύκλου, στη ρύθμιση της διαφοροποίησης των κυττάρων και στην αντιστάθμιση της δόσης. και την πρόληψη ανθρώπινων ασθενειών, και αποτελούν σήμερα ένα από τα hot spots στον τομέα της βιοϊατρικής.

01  Τύποι και χαρακτηριστικά του LncRNA

Το lncRNA χωρίζεται σε πολλούς τύπους ανάλογα με τις διαφορετικές πηγές σχηματισμού του, όπως φαίνεται στο παραπάνω σχήμα.Έχει τα ακόλουθα χαρακτηριστικά:

1. Τα lncRNA είναι συνήθως μακρύτερα, με δυναμική έκφραση και διαφορετικές μεθόδους ματίσματος κατά τη διαφοροποίηση
2. Σε σύγκριση με τα κωδικοποιητικά γονίδια, το lncRNA έχει συνήθως χαμηλότερο επίπεδο έκφρασης
3. Τα περισσότερα lncRNA έχουν προφανή χρονική και χωρική εξειδίκευση έκφρασης στη διαδικασία διαφοροποίησης και ανάπτυξης ιστών
4. Υπάρχουν χαρακτηριστικές εκφράσεις σε όγκους και άλλες ασθένειες
5. Οι υποκυτταρικές θέσεις του lncRNA είναι ποικίλες
6. Η ακολουθία είναι χαμηλή σε διατήρηση, αλλά η συνάρτηση έχει έναν ορισμένο βαθμό διατήρησης κ.λπ.

02 Συχνές ερωτήσεις σχετικά με την αντίστροφη μεταγραφή LncRNA

Λόγω της χαμηλής περιεκτικότητας σε lncRNA στα κύτταρα, του μεγάλου μήκους και της δομής υψηλού επιπέδου, ένα τέτοιο RNA έχει συχνά πολύπλοκες δομές όπως βρόχους στελέχους ή φουρκέτες και η RT-qPCR είναι επιρρεπής σε προβλήματα ανεπιτυχούς αντίστροφης μεταγραφής ή χαμηλής απόδοσης.

03 Διάλυμα αντίστροφης μεταγραφής LncRNA

Στον κεντρικό κανόνα, η διαδικασία των ιών RNA που χρησιμοποιούν τη δική τους αντίστροφη μεταγραφάση για τη σύνθεση DNA χρησιμοποιώντας το RNA ως πρότυπο ονομάζεται αντίστροφη μεταγραφή.Η διαδικασία χρήσης της αντίστροφης μεταγραφάσης του ιού RNA για τη σύνθεση εκμαγείου cDNA in vitro ονομάζεται αντίστροφη μεταγραφή.Τα κύρια στοιχεία που περιλαμβάνονται στο σύστημα αντίστροφης μεταγραφής: πρότυπο RNA, αντίστροφη μεταγραφάση, εκκινητές και άλλα συστατικά.

Πρότυπο 1.RNA

Η επίδραση του προτύπου RNA στην αντίστροφη μεταγραφή αντανακλάται στη δομή, την καθαρότητα και την ακεραιότητά του.Όσο υψηλότερη είναι η καθαρότητα και η ακεραιότητα του εξαγόμενου RNA, τόσο μεγαλύτερη είναι η αποτελεσματικότητα της αντίστροφης μεταγραφής και τόσο πιο ακριβή είναι τα επακόλουθα ποσοτικά αποτελέσματα.Το RNA που καθαρίζεται με κοινώς χρησιμοποιούμενα αντιδραστήρια εκχύλισης RNA περιέχει συχνά υπολείμματα αλάτων αλκοόλης και γουανιδίνης, τα οποία έχουν ισχυρή ανασταλτική δράση στις περισσότερες αντίστροφες μεταγραφάσες.

2.Αντίστροφη μεταγραφάση

Η αντίστροφη μεταγραφάση έχει βασική επιρροή σε ολόκληρο το σύστημα αντίστροφης μεταγραφής.Η κατάλληλη θερμοκρασία για την αντίστροφη μεταγραφάση που χρησιμοποιείται στα περισσότερα εργαστήρια είναι γενικά 42°C.Στην πραγματικότητα, το άνοιγμα της δομής RNA υψηλού επιπέδου απαιτεί υψηλότερη θερμοκρασία και οι απαιτήσεις για την αντίστροφη μεταγραφάση είναι υψηλότερες.

3.Αλφαβητάρι

Οι εκκινητές αντίστροφης μεταγραφής περιλαμβάνουν ειδικούς για γονίδιο εκκινητές, τυχαίους εκκινητές και εκκινητές Oligo dT.Τα περισσότερα lncRNA δεν περιέχουν ουρές polyA και είναι σημαντικό να ταιριάζουν σωστά οι τυχαίοι εκκινητές με το Oligo dT.

4.Άλλα εξαρτήματα

Δεδομένου του γεγονότος ότι το RNA είναι ιδιαίτερα εύκολο να αποικοδομηθεί, η εισαγωγή συστατικών στο σύστημα αντίστροφης μεταγραφής μπορεί να ελαχιστοποιηθεί, γεγονός που μπορεί να αποτρέψει αποτελεσματικά την είσοδο RNase και να εξασφαλίσει την ομαλή πρόοδο της αντίστροφης μεταγραφής.

Foregeneλαμβάνει από πρότυπο RNA, αντίστροφη μεταγραφή σε qPCR

Συνοδέψτε πλήρως την ανίχνευση lncRNA

Ολικό RNA I ζώουλύσσαΚιτ (με στήλη αφαίρεσης gDNA)

Ολικό RNA Ι κυττάρωνλύσσαΚιτ (με στήλη αφαίρεσης gDNA)

Lnc-RT HeroTM I (With gDNase) (Super Premix για σύνθεση cDNA πρώτης έλικος από lncRNA)

Real Time PCR EasyTM-SYBR Green I

Aπλεονεκτήματα ofΕκχύλιση RNA:

Το κιτ χρησιμοποιεί την τεχνολογία εξαγωγής RNA τρίτης γενιάς, χωρίς να χρειάζεται να χρησιμοποιήσετε DNase.

11 λεπτά από καλλιεργημένα κύτταρα 96, 24, 12 και 6 φρεατίων, υψηλής απόδοσης εκχύλιση ολικού κυτταρικού RNA, χωρίς gDNA, υψηλής καθαρότητας και υψηλής ποιότητας.

Πλεονεκτήματα της αντίστροφης μεταγραφής lncRNA:

Ένα σύστημα αντίστροφης μεταγραφής που αναπτύχθηκε ειδικά για το LncRNA για την γρήγορη αφαίρεση της μόλυνσης του γονιδιωματικού DNA.

Το σύστημα αντίστροφης μεταγραφής έχει υψηλή θερμική σταθερότητα και εξακολουθεί να έχει καλή απόδοση αντίστροφης μεταγραφής στους 50°C.

Πρότυπα με υψηλό περιεχόμενο GC και πολύπλοκη δευτερεύουσα δομή μπορούν να αντιστραφούν με υψηλή απόδοση.

Πλεονεκτήματαof qPCR:

Η Hot start Foregene Taq Polymerase έχει υψηλότερη απόδοση ενίσχυσης, υψηλότερη ευαισθησία ενίσχυσης και υψηλότερη ειδικότητα ενίσχυσης

Το βελτιστοποιημένο Real PCR Easy Mix κάνει το SYBR Green I να έχει υψηλότερη ευαισθησία ανίχνευσης και η ένταση φθορισμού του είναι 3-5 φορές μεγαλύτερη από παρόμοια προϊόντα, γεγονός που μπορεί να καλύψει τις ανάγκες διαφορετικών τύπων ποσοτικών πειραμάτων φθορισμού.