PCR, πολλαπλούς PCR, In situ PCR, Αντίστροφη PCR, RT-PCR, qPCR (1)–PCR

Θα ταξινομήσουμε τις έννοιες, τα βήματα και τις λεπτομέρειες διαφόρων PCR

Ⅰ. PCR

Η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης, που αναφέρεται ως PCR, είναι μια μοριακή βιολογική τεχνολογία που χρησιμοποιείται για τη μεγέθυνση συγκεκριμένων θραυσμάτων DNA.Μπορεί να θεωρηθεί ως ειδική αντιγραφή DNA in vitro.Η DNA πολυμεράση (DNA Polymerase I) ανακαλύφθηκε ήδη από το 1955 και το Klenow Fragment of E. Coli, το οποίο έχει πειραματική αξία και πρακτικότητα, ανακαλύφθηκε από τον Dr. H. Klenow στις αρχές της δεκαετίας του 1970, αλλά επειδή αυτό το ένζυμο δεν ανέχεται τη θερμοκρασία, η υψηλή θερμοκρασία μπορεί να το εκφυλίσει, επομένως δεν μειώνει την αντίδραση εκφυλισμού της πολυμεράσης.Τα ένζυμα που χρησιμοποιούνται σήμερα (ονομάζονται πολυμεράση Taq), απομονώθηκαν από το Thermus aquaticus, ένα βακτήριο θερμής πηγής το 1976. Το χαρακτηριστικό του είναι ότι μπορεί να αντισταθεί σε υψηλή θερμοκρασία και είναι ιδανικό ένζυμο, αλλά χρησιμοποιείται ευρέως μετά τη δεκαετία του 1980.Η αρχική ιδέα του αρχικού πρωτόγονου πρωτοτύπου της PCR είναι παρόμοια με την επιδιόρθωση και αντιγραφή γονιδίων, η οποία προτάθηκε από τον Δρ. KJell Kleppe το 1971. Δημοσίευσε το πρώτο απλό και βραχυπρόθεσμο αντίγραφο γονιδίου (παρόμοιο με τις αντιδράσεις των δύο πρώτων κύκλων της PCR).Η PCR που αναπτύχθηκε σήμερα αναπτύχθηκε από τον Δρ. Kary B. Mullis το 1983. Ο Δρ. Mullis υπηρέτησε εταιρείες PE εκείνο το έτος, επομένως το PE έχει μια ειδική θέση στη βιομηχανία PCR.Ο Δρ. Mullis δημοσίευσε επίσημα την πρώτη σχετική εργασία με τον Saiki και άλλους το 1985. Από τότε, η χρήση της PCR είναι χιλιάδες μίλια την ημέρα και η ποιότητα των σχετικών εγγράφων μπορεί να ειπωθεί ότι κάνει πολλές άλλες ερευνητικές μεθόδους δυσάρεστη.Στη συνέχεια, η τεχνολογία PCR χρησιμοποιείται ευρέως στη βιολογική επιστημονική έρευνα και κλινικές εφαρμογές, καθιστώντας την πιο σημαντική τεχνολογία της έρευνας της μοριακής βιολογίας.Ο Mullis κέρδισε επίσης το Νόμπελ Χημείας το 1993.

PCRΑρχή

Η βασική αρχή της τεχνολογίας PCR είναι παρόμοια με τη φυσική διαδικασία αντιγραφής του DNA και η ειδικότητά του εξαρτάται από τον ολιγονουκλεοτιδικό εκκινητή που είναι συμπληρωματικός και στα δύο άκρα της αλληλουχίας στόχου.Η PCR αποτελείται από τρία βασικά στάδια αντιδράσεων εκφύλισης-ανόπτησης-επέκτασης: ①Εκφυλισμός του DNA εκμαγείου: Αφού το DNA του εκμαγείου θερμανθεί στους 93°C περίπου για ορισμένο χρονικό διάστημα, το διάλυμα διπλού DNA για το DNA διπλής αλυσίδας που σχηματίζεται από την ενίσχυση PCR του προτύπου DNA.②Η ανόπτηση (ένωση) του εκμαγείου DNA και του εκκινητή: Αφού θερμανθεί και εκφυλιστεί το DNA του εκμαγείου σε μία μόνο αλυσίδα, η θερμοκρασία πέφτει στους 55°C περίπου.Η συμπληρωματική αλληλουχία του εκκινητή και το πρότυπο DNA μονής αλυσίδας.③Η επέκταση του εκκινητή: μήτρα DNA-η σύνδεση του εκκινητή βασίζεται στη δράση της πολυμεράσης TaqDNA, με dNTP ως πρώτη ύλη αντίδρασης.Διατηρήστε την αρχή της αντιγραφής, συνθέστε μια νέα ημι-δεσμευμένη αλυσίδα αντιγραφής που συμπληρώνει την αλυσίδα του προτύπου DNA και επαναλάβετε τον κύκλο εκφυλισμού-ανόπτησης-επέκτασης τρεις διαδικασίες μπορούν να λάβουν περισσότερη «ημι-δεσμευμένη αλυσίδα αντιγραφής» και αυτή η νέα αλυσίδα είναι ξανά διαθέσιμη. Γίνετε πρότυπο για τον επόμενο κύκλο.Χρειάζονται 2-4 λεπτά για να ολοκληρωθεί ο βρόχος, το γονίδιο στόχος μπορεί να ενισχυθεί αρκετά εκατομμύρια φορές σε 2-3 ώρες.

ΠρότυποPCRΣύστημα Αντίδρασης

Πέντε στοιχεία αντίδρασης PCR

Υπάρχουν κυρίως πέντε είδη ουσιών που εμπλέκονται στην αντίδραση PCR, δηλαδή εκκινητής, ένζυμο, dNTP, εκμαγείο και ρυθμιστικό διάλυμα (απαιτείται Mg2+).[Διαδικασία PCR]

Η τυπική διαδικασία PCR χωρίζεται σε τρία στάδια

1. Εκφυλισμός DNA (90°C-96°C): Πρότυπα DNA διπλής αλυσίδας υπό θερμική δράση, δεσμοί υδρογόνου σπάνε, σχηματίζοντας DNA μονής αλυσίδας.

2. Ανόπτηση (25℃ -65℃): Η θερμοκρασία του συστήματος μειώνεται, το αστάρι συνδυάζεται με το πρότυπο DNA για να σχηματίσει μια τοπική διπλή αλυσίδα.

3. Επέκταση (70℃ -75℃): Κάτω από τη δράση του ενζύμου Taq (περίπου 72°C, η καλύτερη δραστηριότητα), το dNTP χρησιμοποιείται ως πρώτη ύλη, εκτείνεται από το 5' άκρο του εκκινητή → 3' άκρο, η σύνθεση και το πρότυπο αλληλοσυμπληρώνονται με την αλυσίδα DNA.

Κάθε κύκλος μετουσιώνεται, ανόπτεται και επεκτείνεται, διπλασιάζοντας την περιεκτικότητα σε DNA.Προς το παρόν, λόγω της μικρής περιοχής ενίσχυσης, κάποια PCR μπορεί να αναπαραχθεί σε πολύ σύντομο χρονικό διάστημα, ακόμη και αν η δραστηριότητα του ενζύμου Taq δεν είναι βέλτιστη, επομένως μπορεί να αλλάξει σε δύο βήματα, δηλαδή, η ανόπτηση και η επέκταση μπορούν να πραγματοποιηθούν στους 60°C-65°C ταυτόχρονα.Για να μειωθεί η διαδικασία ανύψωσης και ψύξης και να βελτιωθεί η ταχύτητα απόκρισης.

Χαρακτηριστικά αντίδρασης PCR

● Υψηλής ειδικότητας

Οι συγκεκριμένοι καθοριστικοί παράγοντες της απόκρισης PCR είναι: ①Ο ειδικός συνδυασμός του εκκινητή και του DNA εκμαγείου.②Η αρχή του ζευγαρώματος βάσεων.③ Η πιστότητα της αντίδρασης σύνθεσης πολυμεράσης TaqDNA.④ Η ειδικότητα και η συντηρητικότητα του γονιδίου στόχου.

Ο σωστός συνδυασμός ασταριών και προτύπων είναι το κλειδί.Η σύνδεση του ασταριού και του εκμαγείου και η επέκταση της αλυσίδας του ασταριού βασίζονται στην αρχή της αλκαλικής αντιστοίχισης βάσης.Η πιστότητα των αντιδράσεων σύνθεσης πολυμεράσης και η αντίσταση σε υψηλή θερμοκρασία της Taq DNA πολυμεράσης για τη σύνδεση (ένωση) του εκμαγείου και του εκκινητή στην αντίδραση μπορεί να πραγματοποιηθεί σε υψηλότερη θερμοκρασία.Η ειδικότητα του συνδυασμού είναι πολύ αυξημένη.Το κλιπ μπορεί να διατηρήσει υψηλό βαθμό ορθότητας.Με την επιλογή μιας γενετικής περιοχής στόχου με υψηλή συντηρητικότητα και υψηλή συντηρητικότητα, η ειδικότητά της είναι μεγαλύτερη.

● Υψηλή ευαισθησία

Ο όγκος παραγωγής προϊόντων PCR αυξάνεται κατά δείκτη, ο οποίος μπορεί να επεκτείνει το αρχικό πρότυπο του Picker (PG=10-12) για να αυξήσει το επίπεδο του μικροελεγκτή στο επίπεδο των μικρογραμμαρίων (μg= -6).Τα κύτταρα-στόχοι μπορούν να ανιχνευθούν από 1 εκατομμύριο κύτταρα.στην ανίχνευση ιών, η ευαισθησία της PCR μπορεί να φτάσει τα 3 RFU (μονάδες σχηματίζονται κενά σημεία).το ελάχιστο ποσοστό ανίχνευσης στην επιστήμη των βακτηρίων είναι 3 βακτήρια.

● Απλό και γρήγορο

Η ανάκλαση PCR χρησιμοποιεί μια υψηλής θερμοκρασίας Taq DNA πολυμεράση, η οποία προσθέτει το διάλυμα αντίδρασης κάθε φορά, δηλαδή μια αντίδραση εκφυλισμού-ανοπτήσεως-επέκτασης στο διάλυμα ενίσχυσης DNA και στο δοχείο του λουτρού νερού.Γενικά, η αντίδραση ενίσχυσης ολοκληρώνεται σε 2 έως 4 ώρες.Τα επαυξημένα προϊόντα αναλύονται γενικά με ηλεκτρικό ξίφος και δεν χρειάζεται να χρησιμοποιούν ισότοπα, καμία ραδιενεργή ρύπανση και εύκολη προώθηση.

● Η καθαρότητα του δείγματος είναι χαμηλή

Δεν υπάρχει ανάγκη διαχωρισμού ιών ή βακτηρίων και κυττάρων καλλιέργειας.Τα ακατέργαστα προϊόντα DNA και το RNA μπορούν να χρησιμοποιηθούν ως ενισχυτές.Η ανίχνευση ενίσχυσης DNA μπορεί να χρησιμοποιηθεί απευθείας χρησιμοποιώντας κλινικά δείγματα όπως αίμα, σωματικό υγρό, υγρό πλυσίματος βήχα, μαλλιά, κύτταρα και ζωντανός ιστός.

PCRκοινά προβλήματα

● Εσφαλμένο αρνητικό, χωρίς ενισχυμένες ζώνες

Τα βασικά στάδια της αντίδρασης PCR περιλαμβάνουν: ① παρασκευή νουκλεϊκών οξέων μήτρας, ② ποιότητα και ειδικότητα εκκινητών, ③ την ποιότητα των ενζύμων ④ συνθήκες κύκλου PCR.Η εύρεση του λόγου θα πρέπει επίσης να αναλυθεί και να μελετηθεί για τους παραπάνω συνδέσμους.

Πρότυπα: ① Το πρότυπο περιέχει διάφορες πρωτεΐνες, ② Το πρότυπο περιέχει έναν αναστολέα ενζύμου Taq, ③ Η πρωτεΐνη στο πρότυπο δεν εξαλείφεται, ειδικά η πρωτεΐνη της ομάδας στο χρωμόσωμα.⑤ Η εκφύλιση του νουκλεϊκού οξέος του αποναρκωτή δεν είναι ενδελεχής.Όταν η ποιότητα των ενζύμων και των εκκινητών είναι καλή, δεν υπάρχει ζώνη ενίσχυσης, η οποία είναι πιθανότατα η πεπτική επεξεργασία των δειγμάτων.Υπάρχει κάτι λάθος με τη διαδικασία εκχύλισης νουκλεϊκού οξέος του προτύπου, επομένως για να παρασκευαστεί ένα αποτελεσματικό και σταθερό διάλυμα πέψης, η διαδικασία του θα πρέπει να διορθωθεί και όχι να αλλάξει αυθαίρετα.

Απενεργοποίηση ενζύμου: ένα νέο ένζυμο ή παλαιά και νέα ένζυμα θα πρέπει να χρησιμοποιούνται μαζί για να αναλυθεί εάν η ενζυμική δραστηριότητα έχει χαθεί ή αν είναι ανεπαρκής, οδηγώντας σε ψευδώς αρνητικά.Πρέπει να σημειωθεί ότι το ένζυμο Taq ή το βρωμιούχο αιθίδιο μερικές φορές ξεχνιέται.

Primer: η ποιότητα του ασταριού, η συγκέντρωση του αστάρι και εάν η συγκέντρωση των δύο ασταριών είναι συμμετρική.Είναι ένας κοινός λόγος για την αποτυχία της PCR ή η αυξανόμενη ζώνη δεν είναι ιδανική και επιρρεπής σε διάχυση.Υπάρχουν προβλήματα με την ποιότητα των εκκινητών ορισμένων αριθμών παρτίδας.Οι δύο εκκινητές έχουν υψηλή συγκέντρωση και χαμηλή συγκέντρωση, προκαλώντας ασύμμετρη ενίσχυση χαμηλής απόδοσης.Τα αντίμετρα είναι: ① Επιλέξτε ένα καλό αστάρι για να συνθέσετε μονάδες.② Η συγκέντρωση του ασταριού δεν εξαρτάται μόνο από την τιμή OD, αλλά δίνει επίσης προσοχή στο αρχικό υγρό του ασταριού για να κάνει ηλεκτροφόρηση σε τζελ ζάχαρης άγαρ.Πρέπει να υπάρχει μια ζώνη λωρίδας ασταριού και η φωτεινότητα των δύο εκκινητών θα πρέπει να είναι γενικά συνεπής.Ο ιμάντας, η PCR μπορεί να αποτύχει αυτή τη στιγμή και θα πρέπει να επιλυθεί με τη μονάδα σύνθεσης εκκινητών.Εάν ένα αστάρι είναι υψηλό, η φωτεινότητα είναι χαμηλή και η συγκέντρωσή του πρέπει να είναι ισορροπημένη όταν αραιώνεται.③ Το αστάρι πρέπει να πληρωθεί και να φυλάσσεται σε υψηλή συγκέντρωση για να αποφευχθεί η πολλαπλή κατάψυξη ή η μακροχρόνια ψύξη τμημάτων του ψυγείου, τα οποία θα προκαλέσουν φθορά και υποβάθμιση του ασταριού.④ Η σχεδίαση του ασταριού είναι παράλογη, όπως το μήκος του ασταριού είναι ανεπαρκές και το di cluster σχηματίζεται μεταξύ των ασταριών.

Συγκέντρωση Mg2+: Η συγκέντρωση ιόντων Mg2+ έχει μεγάλη επίδραση στην αποτελεσματικότητα της ενίσχυσης PCR.Η υπερβολική συγκέντρωση μπορεί να μειώσει το αντίθετο φύλο της ενίσχυσης PCR.Εάν η συγκέντρωση είναι πολύ χαμηλή, η έξοδος ενίσχυσης PCR θα κάνει ακόμη και την αποτυχία της ενίσχυσης PCR χωρίς τη ζώνη επέκτασης.

Αλλαγή όγκου αντίδρασης: Ο όγκος που χρησιμοποιείται στην ενίσχυση PCR είναι 20ul, 30ul, και 50ul ή 100uL, ο μεγάλος όγκος της εφαρμογής για ενίσχυση PCR ρυθμίζεται σύμφωνα με διαφορετικούς σκοπούς επιστημονικής έρευνας και κλινικών δοκιμών.Αφού φτιάξετε μικρούς όγκους όπως 20 ul, είναι απαραίτητο να κάνετε μια κατάσταση καλωδίου κατά την κατασκευή του μεγέθους, διαφορετικά θα αποτύχει.

Φυσικοί λόγοι: Ο μετασχηματισμός είναι πολύ σημαντικός για την ενίσχυση PCR.Εάν η θερμοκρασία εκφυλισμού είναι χαμηλή, ο χρόνος εκφυλισμού είναι σύντομος, είναι πιθανό να συμβεί σε ψευδώς αρνητικά.Η πολύ χαμηλή θερμοκρασία ανόπτησης μπορεί να προκαλέσει μη ειδική ενίσχυση και να μειώσει την απόδοση ειδικής ενίσχυσης.Επηρεάζει πολύ τον συνδυασμό εκκινητών και προτύπων για μείωση της αποτελεσματικότητας ενίσχυσης PCR.Μερικές φορές είναι απαραίτητο να χρησιμοποιηθούν τυπικά θερμόμετρα για την ανίχνευση της μεταβλητότητας, της ανόπτησης και της παρατεταμένης θερμοκρασίας στην προέκταση ή τη υδατοδιαλυτή κουζίνα, που είναι ένας από τους λόγους για την αποτυχία της PCR.

Παραλλαγές αλληλουχίας στόχου: Εάν εμφανιστεί η αλληλουχία στόχος, μετάλλαξη ή διαγραφή, ο συνδυασμός του πρωτοτύπου και του προτύπου συνδυάζεται ή λόγω της έλλειψης αλληλουχίας στόχου, ο εκκινητής και το πρότυπο θα χάσουν τη συμπληρωματική αλληλουχία και η ενίσχυση PCR δεν θα είναι επιτυχής.

● Εσφαλμένα θετικά

Η ζώνη ενίσχυσης PCR φαίνεται συνεπής με τη ζώνη αλληλουχίας στόχου και μερικές φορές η ζώνη της είναι πιο καθαρή και υψηλότερη.

Ο σχεδιασμός εκκινητών δεν είναι κατάλληλος: η επιλεγμένη αλληλουχία ενίσχυσης και η αλληλουχία ενίσχυσης μη σκοπού έχουν ομόλογες, επομένως, κατά την ενίσχυση PCR, τα ενισχυμένα προϊόντα PCR είναι αλληλουχίες χωρίς σκοπό.Η αλληλουχία στόχος είναι πολύ μικρή ή ο εκκινητής είναι πολύ μικρός και είναι επιρρεπής σε ψευδώς θετικά.Πρέπει να επανασχεδιαστεί.

Διασταυρούμενη ρύπανση της αλληλουχίας στόχου ή των προϊόντων ενίσχυσης: Υπάρχουν δύο λόγοι για αυτήν τη ρύπανση: Πρώτον, διασταυρούμενη ρύπανση ολόκληρου του γονιδιώματος ή μεγάλων τμημάτων, που οδηγεί σε ψευδώς θετικά αποτελέσματα.Αυτό το είδος ψευδώς θετικού μπορεί να επιλυθεί με τις ακόλουθες μεθόδους: Να είστε προσεκτικοί και ήπιοι κατά τη λειτουργία για να αποτρέψετε την εισπνοή της αλληλουχίας στόχου στο πιστόλι δείγματος ή την εκτόξευση από τον φυγοκεντρικό σωλήνα.Εκτός από ένζυμα και ουσίες που δεν αντέχουν σε υψηλές θερμοκρασίες, όλα τα αντιδραστήρια ή ο εξοπλισμός πρέπει να απολυμαίνονται με υψηλή πίεση.Οι φυγοκεντρικοί σωλήνες και τα δείγματα πρέπει να χρησιμοποιούνται ταυτόχρονα.Όταν είναι απαραίτητο, πριν από την προσθήκη δειγμάτων, ο σωλήνας αντίδρασης και το αντιδραστήριο εκτίθενται σε υπεριώδεις ακτίνες για να καταστραφούν το υπάρχον νουκλεϊκό οξύ.Δεύτερον, μικρά θραύσματα στην ατμοσφαιρική ρύπανση.Αυτά τα μικρά θραύσματα είναι μικρότερα από την αλληλουχία στόχο, αλλά έχουν κάποια ομολογία.Μπορεί να συνδεθεί μεταξύ τους.Μετά τη συμπλήρωση των εκκινητών, το προϊόν PCR μπορεί να επεκταθεί, γεγονός που θα προκαλέσει ψευδώς θετική παραγωγή.Μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τη μείωση ή την εξάλειψη της μεθόδου Nest PCR.

● Εμφάνιση μη ειδικής ζώνης ενίσχυσης

Οι ζώνες που εμφανίστηκαν μετά την ενίσχυση PCR είναι ασυνεπείς με το αναμενόμενο μέγεθος, ή μεγάλες ή μικρές, ή ταυτόχρονα, ή ταυτόχρονα, συγκεκριμένες ζώνες ενίσχυσης και μη ειδικές ζώνες ενίσχυσης.Η εμφάνιση μη ειδικών ζωνών είναι: Πρώτον, οι εκκινητές είναι ατελείς συμπληρωματικοί προς την αλληλουχία-στόχο ή ο πολυμερισμός του εκκινητή για να σχηματιστεί μια συστάδα δις.Το δεύτερο είναι ότι η συγκέντρωση των ιόντων MG2+ είναι πολύ υψηλή, η θερμοκρασία ανόπτησης είναι πολύ χαμηλή και ο αριθμός των κύκλων PCR σχετίζεται.Δεύτερον, η ποιότητα και η ποσότητα των ενζύμων.Συχνά, τα ένζυμα ορισμένων πηγών είναι επιρρεπή σε μη ειδικές ζώνες και τα ένζυμα της άλλης πηγής δεν εμφανίζονται.Μερικές φορές εμφανίζεται και μη ειδική ενίσχυση ενζύμων.Τα αντίμετρα είναι: επανασχεδιασμένα ελκυστικά αν χρειαστεί.Μειώστε την ποσότητα του ενζύμου ή αντικαταστήστε το ένζυμο άλλης πηγής.Μειώστε την ποσότητα του πρωτεύοντος, αυξήστε τον αριθμό των προτύπων κατάλληλα και μειώστε τον αριθμό των κύκλων.Αυξήστε σωστά τη θερμοκρασία ανόπτησης ή χρησιμοποιήστε τη μέθοδο δύο σημείων θερμοκρασίας (εκφυλισμός 93°C, ανόπτηση και επέκταση στους περίπου 65°C).

● Εμφάνιση λεπιών ρυμούλκησης ή κηλίδας ταινίας

Η ενίσχυση PCR μερικές φορές φαίνεται να εφαρμόζεται ή με κέλυφος ή ζώνη σαν χαλί.Για το λόγο αυτό, λόγω της υπερβολικής ποσότητας ενζύμων ή της κακής ποιότητας του ενζύμου, η συγκέντρωση dNTP είναι πολύ υψηλή, η συγκέντρωση Mg2+ είναι πολύ υψηλή, η θερμοκρασία ανόπτησης είναι πολύ χαμηλή και ο αριθμός των κύκλων είναι πολύ μεγάλος.Τα αντίμετρα είναι: ①Μείωση της ποσότητας των ενζύμων ή αλλαγή του ενζύμου άλλης πηγής.②Μειώστε τη συγκέντρωση του dNTP ③Μειώστε σωστά τη συγκέντρωση Mg2+.④ Αυξήστε την ποσότητα των προτύπων και μειώστε τον αριθμό των κύκλων.

Σχετικά προϊόντα

PCR Heroᵀᴹ (Με Βαφή)

◮ Υψηλότερη πιστότητα: 6 φορές αυτή του συνηθισμένου ενζύμου Taq.

◮ Ταχύτερη ταχύτητα ενίσχυσης

◮ Περισσότερη προσαρμοστικότητα προτύπου

◮ Υψηλότερη απόδοση ενίσχυσης

◮ Η περιβαλλοντική ανοχή είναι ισχυρότερη: τοποθετείται στους 37°C για μια εβδομάδα, διατηρώντας πάνω από 90% δραστηριότητα.

◮ Έχει δραστικότητα 5'→3' DNA πολυμεράσης και 5'→3' δράση εξωνουκλεάσης, χωρίς δράση εξωνουκλεάσης 3'→5'.

PCR Easyᵀᴹ (Με Βαφή)

Το μοναδικό σύστημα αντίδρασης και η υψηλής απόδοσης Taq DNA Polymerase κάνουν την αντίδραση PCR να έχει υψηλότερη απόδοση ενίσχυσης, ειδικότητα και ευαισθησία.

RT-qPCR Easyᵀᴹ (One Step)-SYBR Green I

◮ Το κιτ ενός βήματος κάνει την αντίστροφη μεταγραφή και την qPCR δύο αντιδράσεις στον ίδιο σωλήνα, χρειάζεται μόνο να προσθέσετε πρότυπο RNA, ειδικούς εκκινητές PCR και ddH Χωρίς RNase₂O.

◮ Το κιτ μπορεί γρήγορα και αποτελεσματικά να αναλύσει ποσοτικά το ιικό RNA ή το ίχνος RNA.

◮ Το κιτ χρησιμοποιεί ένα μοναδικό αντιδραστήριο αντίστροφης μεταγραφής Foregene και Foregene HotStar Taq DNA Polymerase σε συνδυασμό με ένα μοναδικό σύστημα αντίδρασης για να βελτιώσει αποτελεσματικά την αποτελεσματικότητα ενίσχυσης και την ειδικότητα της αντίδρασης.

◮ Το βελτιστοποιημένο σύστημα αντίδρασης κάνει την αντίδραση να έχει υψηλότερη ευαισθησία ανίχνευσης, ισχυρότερη θερμική σταθερότητα και καλύτερη ανοχή.

◮ RT-qPCR Easy^TM(One Step)-Το κιτ SYBR Green I συνοδεύεται από εσωτερική βαφή αναφοράς ROX, η οποία μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την εξάλειψη σφαλμάτων φόντου σήματος και σήματος μεταξύ των φρεατίων, κάτι που είναι βολικό για τους πελάτες να χρησιμοποιούν σε διαφορετικά μοντέλα οργάνων ποσοτικής PCR.

RT Easy^TMII (Master Premix για σύνθεση cDNA πρώτου κλώνου γιαPCR σε πραγματικό χρόνο)

-Αποτελεσματική ικανότητα αφαίρεσης gDNA, η οποία μπορεί να αφαιρέσει το gDNA στο πρότυπο μέσα σε 2 λεπτά.

-Αποτελεσματικό σύστημα αντίστροφης μεταγραφής, χρειάζονται μόνο 15 λεπτά για να ολοκληρωθεί η σύνθεση του πρώτου κλώνου cDNA.

-Σύνθετα πρότυπα: πρότυπα με υψηλό περιεχόμενο GC και σύνθετη δευτερεύουσα δομή μπορούν επίσης να αντιστραφούν με υψηλή απόδοση.

-Σύστημα αντίστροφης μεταγραφής υψηλής ευαισθησίας, τα πρότυπα σε επίπεδο pg μπορούν επίσης να λάβουν cDNA υψηλής ποιότητας.

-Το σύστημα αντίστροφης μεταγραφής έχει υψηλή θερμική σταθερότητα, η βέλτιστη θερμοκρασία αντίδρασης είναι 42℃ και εξακολουθεί να έχει καλή απόδοση αντίστροφης μεταγραφής στους 50℃.