Εισαγωγή:

Τα μόρια RNA μπορούν να αλληλεπιδράσουν εκτενώς με άλλα βιολογικά μόρια, όπως πρωτεΐνη, DNA και RNA, και έτσι υπάρχουν σε κύτταρα και οργανισμούς με τη μορφή μακρομοριακών συμπλεγμάτων.Μεταξύ αυτών, σύμπλοκα RNA-πρωτεΐνης είναι η ύπαρξη και η λειτουργία του RNA Μία από τις σημαντικές μορφές του.Το RNA pull-down είναι μια κλασική μέθοδος για τον έλεγχο και τον εντοπισμό μορίων RNA, ειδικά των αλληλεπιδρώντων πρωτεϊνών των μορίων lncRNA, και αναγνωρίζεται από την πλειονότητα των ερευνητών και διεθνών έγκυρων ακαδημαϊκών περιοδικών.Σήμερα το FORREGENE θα μοιραστεί μαζί σας την πειραματική αρχή και την τεχνική διαδικασία του pull-down RNA, ίσως μπορείτε να το χρησιμοποιήσετε

1. Η πειραματική αρχή της τεχνολογίας pull down RNA:

Μεταγραφή και σύνθεση in vitro σημασμένων με βιοτίνη στόχων lncRNA ή θραυσμάτων lncRNA (συμπεριλαμβανομένων θραυσμάτων RNA που χρησιμοποιούνται ως θετικοί και αρνητικοί μάρτυρες) και επώαση με εκχυλίσματα κυττάρων.χρησιμοποιήστε μαγνητικά σφαιρίδια αγκυρωμένα με αβιδίνη για τη συλλογή συμπλεγμάτων RNA-πρωτεΐνης ή RNA-RNA. Μετά από σχολαστική πλύση, το σύμπλοκο εκλούεται.Εάν ανιχνεύσετε το μόριο-στόχο πρωτεΐνης που αλληλεπιδρά με το lncRNA, πραγματοποιήστε ηλεκτροφόρηση πρωτεΐνης στο προϊόν RNA-pull down, ανιχνεύστε την πρωτεΐνη στόχο με χρώση αργύρου και κόψτε το πήκτωμα για φασματομετρία μάζας.Εκτελέστε επίσης απευθείας επαλήθευση Western blot στο pull-down προϊόν.εάν ανιχνευθεί Για μόρια στόχους RNA που αλληλεπιδρούν με το lncRNA, τα RNA-pull down προϊόντα υποβάλλονται σε εξαγωγή RNA και εκτελείται ειδική ανίχνευση qRT-PCR.

2. Διαδικασία πειράματος τεχνολογίας pull down RNA:

3. Τεχνική υπηρεσία για την απόσυρση RNA του FOREGENE:

Κυτταρικής καλλιέργειας

Παρασκευή εκχυλίσματος ολικού κυτταρικού/πυρηνικού/πρωτεϊνικού πλάσματος

Πείραμα έλξης RNA

Ηλεκτροφόρηση SDS-PAGE, χρώση αργύρου

Φασματομετρία μάζας και πειράματα WB

Πειραματική έκθεση

4. Πειραματική υπόθεση

Το παρακάτω σχήμα δείχνει τα αποτελέσματα της ανίχνευσης του RNA του FJ Bio-Bio και της ηλεκτροφόρησης SDS-PAGE, στα οποία το κόκκινο βέλος επισημαίνει τη διαφορά ζώνης:

Η ερευνητική ομάδα του καθηγητή Song Xu του Πανεπιστημίου Sichuan έχει συσσωρεύσει 15 χρόνια μακροπρόθεσμης συσσώρευσης στον τομέα της έρευνας lncRNA.Η Foregene Bio και η ερευνητική ομάδα του καθηγητή Song Xu συνεργάστηκαν για να λανσάρουν την τεχνολογία pull down RNA του lncRNA, η οποία θα σας δώσει ένα ικανοποιητικό αποτέλεσμα για το πείραμά σας.