Οι εργαστηριακές δοκιμές ξεκινούν με τη συλλογή δειγμάτων και η συλλογή δειγμάτων είναι το πιο εύκολο να παραβλεφθεί.Το πιο σημαντικό πράγμα για τη συλλογή δειγμάτων είναι να επιλέξετε τον σωστό τύπο δείγματος, να χρησιμοποιήσετε κατάλληλα εργαλεία δειγματοληψίας και να πραγματοποιήσετε λογική μεταφορά και επεξεργασία.

I.Τύπος δείγματος

Οι συνήθεις τύποι δειγμάτων είναι οι εξής:

Η μέθοδος δειγματοληψίας μπορεί να αναφέρεται στις τεχνικές προδιαγραφές για την περιβαλλοντική παρακολούθηση του νέου κοροναϊού στην αγορά εμπορίου γεωργικών προϊόντων (παζάρι):

1. Δείγματα επιχρίσματος από επιχρίσματα λαιμού, χέρια, ρούχα και άλλα αντικείμενα των ιατρών: απαιτείται η χρήση του διαλύματος συντήρησης του ιού στο σωληνάριο δειγματοληψίας ιού και η πλήρης διείσδυση στα βαμβακερά επιχρίσματα δειγματοληψίας.Η επιφάνεια του εδάφους) εφαρμόζεται επανειλημμένα και ξεπλένεται για περισσότερες από 3 φορές.Ταυτόχρονα, είναι απαραίτητο να πραγματοποιηθεί κατανεμημένη δειγματοληψία πολλαπλών σημείων στην επιφάνεια του αντικειμένου του δείγματος.

2. Δείγματα επιχρίσματος επιφανείας τροφίμου: Τα δείγματα τροφίμων δεν μπορούν να συλλεχθούν απευθείας.Τα τρόφιμα που πρόκειται να συλλεχθούν πρέπει να διαχωρίζονται προσεκτικά και να φυλάσσονται σε καθαρό σάκο δειγματοληψίας πριν από τη συλλογή δειγμάτων επιχρίσματος.Απαιτείται η χρήση του διαλύματος συντήρησης του ιού στο σωληνάριο δειγματοληψίας ιού, μετά την πλήρη διαβροχή του βαμβακιού δειγματοληψίας, για επανειλημμένη επάλειψη και έκπλυση της επιφάνειας του δείγματος τροφής που πρόκειται να συλλεχθεί περισσότερες από 3 φορές.Ταυτόχρονα, είναι απαραίτητο να πραγματοποιηθεί κατανεμημένη δειγματοληψία πολλαπλών σημείων στην επιφάνεια του δείγματος.

3. Δείγματα λυμάτων: Ανάλογα με την κατανομή του συστήματος αποχέτευσης στην αγορά, επιλέξτε 2-3 θέσεις δειγματοληψίας λυμάτων, εστιάζοντας στη συλλογή του εσωτερικού δικτύου σωληνώσεων, στην κατάντη κατεύθυνση της ροής του νερού ή στη σύνδεση με το δημοτικό δίκτυο σωληνώσεων.Για να συλλέξετε ένα δείγμα μπατονέτας, βυθίστε το στα λύματα με ένα βαμβάκι δειγματοληψίας για να απορροφήσει τα λύματα και ξεπλύντε το στο σωλήνα δειγματοληψίας περισσότερες από 3 φορές.Για τη συλλογή δειγμάτων λυμάτων, χρησιμοποιήστε πλαστικά μπουκάλια πολυαιθυλενίου για τη συλλογή δειγμάτων λυμάτων 30-500 mL.για συλλογή λυμάτων με όγκο μεγαλύτερο από 500 mL, μπορούν να χρησιμοποιηθούν πλαστικοί κάδοι πολυαιθυλενίου ή ειδικός εξοπλισμός εμπλουτισμού δειγμάτων νερού επιτόπου.Ταυτόχρονα, είναι απαραίτητη η διενέργεια κατανεμημένων δειγματοληψιών πολλαπλών σημείων για τη θέση δειγματοληψίας λυμάτων.

4. Δείγματα ζώων: Για ζωντανά ζώα, μπορούν να χρησιμοποιηθούν επιχρίσματα δειγματοληψίας για τη συλλογή επιχρισμάτων επιφάνειας σώματος, στοματοφαρυγγικά επιχρίσματα και επιχρίσματα πρωκτού, και δείγματα περιττωμάτων ή εκκρίσεων μπορούν επίσης να συλλεχθούν και να καταγραφούν ανάλογα στο φύλλο καταγραφής.Για δείγματα ζώων που έχουν υποστεί εκδορά κ.λπ., χρησιμοποιήστε βαμβακερά επιχρίσματα για να συλλέξετε δείγματα από την επιφάνεια του σώματός τους και τα επιχρίσματα της κοιλότητας του σώματος.Απαιτείται η χρήση του διαλύματος συντήρησης του ιού στο σωληνάριο δειγματοληψίας ιού για να διεισδύσει πλήρως το βαμβάκι δειγματοληψίας και, στη συνέχεια, να επαναληφθεί η εφαρμογή της επιφάνειας του δείγματος τροφής που πρόκειται να συλλεχθεί.Shabu περισσότερες από 3 φορές.Ταυτόχρονα, είναι απαραίτητο να πραγματοποιηθεί κατανεμημένη δειγματοληψία πολλαπλών σημείων στην επιφάνεια του δείγματος.

5. Άλλες συσκευές: δοχεία για τη μεταφορά και την αναπαραγωγή ζώων όπως κλουβιά ή δεξαμενές ψαριών.Αρχικά, παρατηρήστε ή κατανοήστε τους συγκεκριμένους τύπους ζώων που αποθηκεύονται και εκτρέφονται στο δοχείο και συλλέξτε δείγματα επιχρίσματος στο εσωτερικό τοίχωμα του δοχείου ή υγρά δείγματα του περιεχομένου.

6. Συλλέξτε δείγματα αερολύματος σε χώρους όπου συγκεντρώνονται άνθρωποι, τοπικούς χώρους συναλλαγών που δεν αερίζονται καλά, γραφεία και χώρους ανάπαυσης.

II.Εργαλεία δειγματοληψίας
1. Σωλήνας συλλογής αίματος
Εάν χρειαστεί να κάνετε εξετάσεις νουκλεϊκού οξέος και δείγματα αντιπηκτικών αργότερα, συνιστάται η χρήση αιμοφόρου αγγείου κενού που περιέχει αντιπηκτικό EDTA για τη συλλογή αίματος.για δείγματα ορού, συνιστάται η χρήση αιμοφόρου αγγείου κενού χωρίς αντιπηκτικό.

2. Μάκτρο δειγματοληψίας

Συνιστάται η χρήση επιχρισμάτων πολυπροπυλενίου αντί για επιχρίσματα αλγινικού ασβεστίου ή επιχρίσματα με ξύλινους στύλους, επειδή μπορεί να περιέχουν ουσίες που αδρανοποιούν ορισμένους ιούς και αναστέλλουν τη δοκιμή PCR.Επιχρίσματα με βαμβακερές κεφαλές δεν μπορούν να χρησιμοποιηθούν, επειδή οι ίνες βαμβακιού έχουν ισχυρή προσρόφηση πρωτεΐνης και δεν εκλούονται εύκολα στο επόμενο διάλυμα συντήρησης.

Στις «Τεχνικές Προδιαγραφές για Μικτή Συλλογή και Ανίχνευση Νουκλεϊκών Οξέων 10 σε 1», ορίζεται ξεκάθαρα ότι «η μπατονέτα δειγματοληψίας πρέπει να είναι κατασκευασμένη από πολυεστέρα, νάιλον και άλλα μη βαμβακερά και μη αλγινικά υλικά και η λαβή να είναι κατασκευασμένη από μη ξύλινο υλικό.Το σημείο θραύσης είναι περίπου 3 εκατοστά από την κορυφή της κεφαλής της μπατονέτας, η οποία είναι εύκολο να σπάσει.»

Το CDC στις Ηνωμένες Πολιτείες ανέφερε επίσης «Χρησιμοποιήστε μόνο μάκτρα από συνθετικές ίνες με πλαστικούς ή συρμάτινους άξονες.Μην χρησιμοποιείτε επιχρίσματα αλγινικού ασβεστίου ή επιχρίσματα με ξύλινους άξονες,καθώς μπορεί να περιέχουν ουσίες που αδρανοποιούν ορισμένους ιούς και αναστέλλουν τη δοκιμή PCR.

Επί του παρόντος χρησιμοποιείται ευρέως ένα αποστειρωμένο μάκτρο νάιλον μιας χρήσης σε συνδυασμό με μια πλαστική ράβδο.Η μπατονέτα έχει καλύτερη απορρόφηση νερού και ρυθμό απελευθέρωσης.Σύμφωνα με διαφορετικές τοποθεσίες δειγματοληψίας, η κεφαλή του στυλεού έχει επίσης διαφορετικά μεγέθη και ίνες.Το πάχος.”

3. Διάλυμα συντήρησης μεταφοράς δειγμάτων

Διάλυμα διατήρησης αδρανοποίησης ιού: μια κατάλληλη ποσότητα συγκέντρωσης άλατος γουανιδίνης και μια ποικιλία συστατικών λύσης ιού μπορούν να λύσουν απευθείας τον ιό για να απελευθερώσει νουκλεϊκό οξύ, να απενεργοποιήσει τη RNase και τη DNase και να εξασφαλίσει την ακεραιότητα του νουκλεϊκού οξέος, το οποίο μπορεί να χρησιμοποιηθεί για μετέπειτα ανίχνευση qPCR.Δεν μπορεί να χρησιμοποιηθεί για καλλιέργεια και απομόνωση ιών.

Διάλυμα μεταφοράς και συντήρησης ιών: περιέχει άλατα, αμινοξέα, βιταμίνες, γλυκόζη και πρωτεΐνες που απαιτούνται για την επιβίωση του ιού, οι οποίες μπορούν να διατηρήσουν τη δραστηριότητα του ιού.Μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την εξαγωγή νουκλεϊκού οξέος και την ανίχνευση του ιού στο μέλλον, και μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί για την καλλιέργεια και τον διαχωρισμό του ιού.

4. Σωλήνας συντήρησης δειγμάτων και σακούλα δειγμάτων

Ο σωλήνας αποθήκευσης δείγματος θα πρέπει να είναι ένας αποστειρωμένος πλαστικός σωλήνας με βιδωτό καπάκι που δεν προσροφά νουκλεϊκό οξύ.Κάθε σωληνάριο δείγματος θα πρέπει να καλύπτεται με μια σακούλα δείγματος για να αποφευχθεί η διαρροή και η μόλυνση του δείγματος.

III.Παρεμβαίνουσες ουσίες στο δείγμα

Παρεμβαίνουσες ουσίες σε πειράματα PCR

1. ενδογενής παρεμβολή

Ουσίες που υπάρχουν στο δείγμα σώματος μπορεί να παρεμποδίσουν την ανίχνευση άλλων ουσιών.

Αίμα:αίμη (>1mg/ml), αιμίνη (>0,1ng/μl), τριγλυκερίδια, IgG κ.λπ.

Ούρο:Ουρία (20 mM);

Σκαμνί:φυτικοί πολυσακχαρίτες, cholate?

Ιστός:πρωτεάση, κολλαγόνο;

Γάλα: πρωτεάση, ιόν ασβεστίου;

Φάρμακα: αντιβιοτικά, αντιιικά φάρμακα, ορμόνες κ.λπ.

άλλα.

2. εξωγενής παρεμβολή

Προέρχεται από ουσίες που μπορούν να επηρεάσουν την ανίχνευση άλλων ουσιών in vitro.Πρόσθετα δειγμάτων και ουσίες που μπορούν να έρθουν σε επαφή κατά τη συλλογή και επεξεργασία δειγμάτων:

Προμήθειες δοκιμής: τζελ διαχωρισμού ορού, δοχείο συλλογής δειγμάτων και ελαστικό πώμα, καθετήρας, υγρό έκπλυσης καθετήρα, σκόνη γαντιών κ.λπ.

Αντιπηκτικό: ηπαρίνη (>0,1 U/mL), EDTA (>0,5 mM), κ.λπ.;

Οργανικοί διαλύτες: ισοπροπανόλη (>0,1 IU/ml), βεταΐνη, διμεθυλοσουλφοξείδιο, φορμαμίδη, γλυκερίνη, PEG, κ.λπ.

Απολυμαντικά: αλκοόλες (αιθανόλη>1%), αλδεΰδες, φαινόλες (φαινόλη>0,2%), υπεροξείδια, ισχυρά οξέα (HCL), ισχυρά αλκάλια (NaOH) κ.λπ.;

Απορρυπαντικό:SDS (>0,005%);

Εδαφος: Χούμο

Βαφές: Indigo

άλλα.

Υπό πραγματικές συνθήκες δειγματοληψίας εξωτερικού χώρου, όπως η συλλογή περιβαλλοντικών δειγμάτων, τα δείγματα μπορεί να περιέχουν μια ποικιλία παρεμβαλλόμενων ουσιών και η σύνθεση των παρεμβαλλόμενων ουσιών σε κάθε τοποθεσία είναι διαφορετική, γεγονός που απαιτεί τη διεξαγωγή πειραμάτων παρεμβολής PCR σύμφωνα με τις τοπικές συνθήκες.

IV.Συνθήκες αποθήκευσης και μεταφοράς δειγμάτων

Τα πρόσφατα συλλεγμένα κλινικά δείγματα θα πρέπει να αποστέλλονται στο εργαστήριο εντός 2 έως 4 ωρών μετά τη συλλογή στους 2°C έως 8°C.Αποθηκεύστε στους 4℃ μέσα σε 24 ώρες.Τα δείγματα που χρησιμοποιούνται για την απομόνωση του ιού και την ανίχνευση νουκλεϊκών οξέων θα πρέπει να ελέγχονται το συντομότερο δυνατό.Τα δείγματα που μπορούν να ελεγχθούν εντός 24 ωρών μπορούν να φυλαχθούν στους 4°C.δείγματα που δεν μπορούν να ανιχνευθούν εντός 24 ωρών θα πρέπει να φυλάσσονται σε θερμοκρασία -70°C ή χαμηλότερη (εάν όχι- Φυλάσσεται στους 70°C σε ψυγείο στους -20°C).

Περίληψη:Η τυποποιημένη συλλογή, μεταφορά και αποθήκευση των δειγμάτων είναι απαραίτητες για τις επόμενες δοκιμές.Τα ψευδώς αρνητικά πολλών εργαστηριακών εξετάσεων προκαλούνται από ακατάλληλη συλλογή, μεταφορά και αποθήκευση δειγμάτων που οδηγούν σε αποδόμηση του ιικού νουκλεϊκού οξέος.Ωστόσο, πολλά εργαστήρια εξακολουθούν να αγνοούν τη σημασία της δειγματοληψίας.Ελπίζω ότι αυτό το άρθρο μπορεί να ξυπνήσει την προσοχή όλων στη δειγματοληψία και να κάνει πιο επιστημονική και λογική δειγματοληψία!

Σχετικό προϊόν:

SARS-CoV-2 Variant Nucleic Acid Detection Kit (I) (Multiplex PCR Fluorescent Probe Method)-Για ανίχνευση μεταλλαγμένων από τη Βραζιλία, τη Νότια Αφρική και το Ηνωμένο Βασίλειο