Οι μέθοδοι PCR και η μόλυνση με αεροζόλ νουκλεϊκού οξέος σε εργαστήρια δοκιμών νουκλεϊκών οξέων είναι σαν τις δύο όψεις ενός νομίσματος.Μπορούμε μόνο να επιλέξουμε να το έχουμε ή όχι, αλλά δεν μπορούμε να επιλέξουμε αν το θέλουμε ή αν το ξοδέψουμε.

1. Έλεγχος αφαίρεσης DNA

Για να επιτευχθεί η χωρική απομάκρυνση της μόλυνσης από αεροζόλ νουκλεϊκού οξέος, είναι πρώτα απαραίτητο να εξεταστούν τα προϊόντα αφαίρεσης DNA που μπορούν να αφαιρέσουν τα νουκλεϊκά οξέα σε υγρή κατάσταση.Επειδή δεν υπάρχουν πολλά προϊόντα αφαίρεσης DNA που πραγματικά λειτουργούν.Για την πειραματική μέθοδο, ανατρέξτε στο: Το προϊόν αφαίρεσης DNA δεν μπορεί να είναι μια «μυστική γωνία» του εργαστηρίου!

Σε αυτό το πείραμα, 100 αντίγραφα/μL (CT περίπου 31) ​​πλασμιδίου ASFV και αφαίρεσης DNA που ποσοτικοποιήθηκαν με ψηφιακή PCR αναμίχθηκαν σε ίσους όγκους και στη συνέχεια αντέδρασαν σε θερμοκρασία δωματίου για 10 λεπτά, 20 λεπτά και 30 λεπτά αντίστοιχα.Μετά την εκχύλιση νουκλεϊκού οξέος, πραγματοποιήθηκε ενίσχυση qPCR.Συγκρίθηκε ένας θετικός έλεγχος αναμεμειγμένος με πλασμίδιο και νερό.Δεδομένου ότι το πείραμα δεν ολοκληρώθηκε ταυτόχρονα, μπορεί να υπάρχει κάποια απόκλιση μεταξύ των αποτελεσμάτων, αλλά δεν επηρεάζει το συμπέρασμα του πειράματος.Μέχρι στιγμής, έχω αξιολογήσει 10 εμπορικά προϊόντα αφαίρεσης DNA.Μόνο τα προϊόντα Νο. 1, Νο. 6 και Νο. 8 μπορούν να αποικοδομήσουν αποτελεσματικά το DNA του πλασμιδίου σε υγρή κατάσταση.Άλλα προϊόντα δεν έχουν σχεδόν κανένα αποτέλεσμα.

Πίνακας 1 Αποτέλεσμα απομάκρυνσης νουκλεϊκού οξέος του εμπορικά διαθέσιμου μέσου αφαίρεσης DNA

2. Το πείραμα επίδρασης αφαίρεσης DNA των κοινώς χρησιμοποιούμενων απολυμαντικών

1. Έλεγχος απολυμαντικών που χρησιμοποιούνται συνήθως

Υπάρχουν πολλοί τύποι απολυμαντικών που χρησιμοποιούνται συνήθως στα εργαστήρια: αλδεΰδες, φαινόλες, αλκοόλες, άλατα τεταρτοταγούς αμμωνίου, υπεροξείδια, παρασκευάσματα χλωρίου και οξέα και βάσεις.Οι απολυμαντικές επιδράσεις αυτών των απολυμαντικών σε μικροοργανισμούς έχουν επαληθευτεί πλήρως από πειράματα, αλλά δεν υπάρχουν επαρκή πειραματικά δεδομένα σχετικά με την επίδραση αποδόμησης των νουκλεϊκών οξέων.Τα εργαστήρια δοκιμών νουκλεϊκών οξέων χρειάζονται ένα απολυμαντικό που όχι μόνο έχει καλή απολυμαντική δράση στους μικροοργανισμούς, αλλά μπορεί επίσης να υποβαθμίσει το DNA.Τα αποτελέσματα των δοκιμών δείχνουν ότι μόνο δύο παρασκευάσματα χλωρίου 84 απολυμαντικού και τριχλωροϊσοκυανουρικού οξέος και 1 Μ υδροχλωρικού οξέος πληρούν τις απαιτήσεις.Δεδομένου ότι το υδροχλωρικό οξύ 1 M είναι πολύ διαβρωτικό, συνιστάται η χρήση παρασκευασμάτων χλωρίου ως απόρριψης αποβλήτων σε εργαστήρια δοκιμών νουκλεϊκών οξέων.Ωστόσο, τα παρασκευάσματα χλωρίου είναι διαβρωτικά για τα μέταλλα και δεν μπορούν να χρησιμοποιηθούν για την απολύμανση οργάνων και εξοπλισμού.

Πίνακας 2 Επιδράσεις αφαίρεσης DNA διαφορετικών τύπων απολυμαντικών

2. Η ελάχιστη αποτελεσματική συγκέντρωση παρασκευασμάτων χλωρίου

Τα απολυμαντικά με βάση το χλώριο έχουν ισχυρή επίδραση υποβάθμισης του DNA, αλλά λόγω της διαβρωτικής και ερεθιστικής τους ικανότητας μετάλλων, μπορούν να χρησιμοποιηθούν για τον καθαρισμό του δαπέδου, των μη μεταλλικών πάγκων, των άκρων εμποτισμού, των σωλήνων φυγοκέντρησης και άλλων δοκιμών.

Σύμφωνα με τις «Τεχνικές κατευθυντήριες οδηγίες για την επιδημική απολύμανση της στεφανιαίας πνευμονίας»: Ρύποι (αίμα ασθενών, εκκρίσεις και έμετος) διαθέσιμο χλώριο 5g/L-10g/L απολυμαντικό που περιέχει χλώριο.Τα δάπεδα, οι τοίχοι και οι επιφάνειες αντικειμένων χρησιμοποιούν διαθέσιμο χλώριο 1 g/L Απολυμαντικό χλωρίου: τα ρούχα, τα κλινοσκεπάσματα και άλλα υφάσματα εμποτίζονται πρώτα σε απολυμαντικό χλωρίου με 0,5 g/L διαθέσιμο χλώριο για 30 λεπτά και στη συνέχεια καθαρίζονται ως συνήθως.

Πίνακας 3 Αποτέλεσμα αφαίρεσης DNA διαφορετικών συγκεντρώσεων απολυμαντικού χλωρίου

Τα αποτελέσματα της δοκιμής δείχνουν ότι: όταν η αποτελεσματική συγκέντρωση χλωρίου είναι μεγαλύτερη ή ίση με 1,2 g/L, το απολυμαντικό που περιέχει χλώριο μπορεί να αποικοδομήσει πλήρως 100 αντίγραφα/μL πλασμιδίου όταν χρησιμοποιείται για 5 λεπτά.Όταν δράσει για 10 λεπτά, το απολυμαντικό 84 με αποτελεσματική συγκέντρωση χλωρίου μεγαλύτερη ή ίση με 0,6 g/L μπορεί να αποικοδομήσει πλήρως 100 αντίγραφα/μL πλασμιδίων.

3. Πείραμα αφαίρεσης αέρα μολυσμένο από αεροζόλ νουκλεϊκού οξέος

Πώς να καθαρίσετε τον αέρα που έχει μολυνθεί από αερολύματα νουκλεϊκών οξέων;Οι περισσότερες σκέψεις είναι να δημιουργήσουμε ένα περιβάλλον μολυσμένο με αεροζόλ και στη συνέχεια να το καθαρίσουμε ή να καθαρίσουμε τα νουκλεϊκά οξέα μετά τη μόλυνση.Για μένα, ένα πείραμα που δεν μπορεί να επαναληφθεί και τα αποτελέσματα του πειράματος δεν μπορούν να αναλυθούν ποσοτικά δεν έχει νόημα, οπότε δανείστηκα μερικές μεθόδους απολύμανσης αέρα με απολυμαντικό.Δείτε "GB27948-2020 Γενικές Απαιτήσεις για Απολυμαντικά Αέρα" και "Τεχνικές Προδιαγραφές Απολύμανσης"

1. Υλικά δοκιμής

1.1 Αφαίρεση DNA: Σε αυτό το πείραμα, επιλέχθηκαν δύο εμπορικά διαθέσιμα προϊόντα αφαίρεσης DNA 6 και 8 στον Πίνακα 1.

1.2 Πλασμίδιο δοκιμής: Λαμβάνοντας υπόψη ότι η τιμή CT των περισσότερων εργαστηριακών ρύπων θα είναι υψηλότερη από 30, η συγκέντρωση του πλασμιδίου γονιδίου ASFV που χρησιμοποιείται αυτή τη φορά είναι περίπου 100 αντίγραφα/μL και η φθορίζουσα ποσοτική CT PCR είναι περίπου 31,07.Προσθέστε το πλασμίδιο στη μπατονέτα και στεγνώστε τον στον αέρα.

1.3 Όργανο δοκιμής: Το όργανο απολύμανσης Bilingkehan KVBOX, το οποίο υποστηρίζεται ευγενικά από την Shenzhen Runlian Environmental Technology Co., Ltd., έχει εξαιρετική απόδοση απολύμανσης αέρα με απολυμαντικό υπεροξειδίου του υδρογόνου και μπορεί να σκοτώσει αποτελεσματικά σπόρια και άλλους μικροοργανισμούς.

1.4 Χώρος δοκιμής: κλειστό παράθυρο μεταφοράς περίπου 0,1 κυβικών μέτρων.

2. Μέθοδος δοκιμής

Η ποσότητα του απολυμαντικού που έχει οριστεί στη μηχανή απολύμανσης είναι 10 ml και η συγκέντρωση είναι 100 ml/m3, η οποία είναι πολύ μεγαλύτερη από τις «Γενικές απαιτήσεις για απολυμαντικά αέρα GB27948-2020»: όταν χρησιμοποιείτε απολύμανση με σπρέι αεροζόλ, η ποσότητα απολυμαντικού πρέπει να είναι ≤10 ml/m3