Animal Total RNA Isolation Kit Κιτ εξαγωγής και καθαρισμού ολικού RNA για ζωικούς ιστούς και κύτταρα
Περιγραφή κιτ:
Εξάγετε γρήγορα και αποτελεσματικά ολικό RNA υψηλής καθαρότητας και υψηλής ποιότητας από διάφορους ζωικούς ιστούς.
Δεν χρειάζεται να ανησυχείτε για την αποικοδόμηση του RNA.Ολόκληρο το σύστημα είναι Χωρίς RNase
Αφαιρέστε αποτελεσματικά το DNA χρησιμοποιώντας τη στήλη καθαρισμού DNA
Αφαιρέστε το DNA χωρίς προσθήκη DNase
Απλή—όλες οι λειτουργίες ολοκληρώνονται σε θερμοκρασία δωματίου
Γρήγορη—η λειτουργία μπορεί να ολοκληρωθεί σε 30 λεπτά
Ασφαλές—δεν χρησιμοποιείται οργανικό αντιδραστήριο
Υψηλή καθαρότητα-OD260/280≈1,8-2,1
Περιγραφές κιτ
50 Προετοιμασίες, 200 Προετοιμασίες
Αυτό το κιτ χρησιμοποιεί τοστήλη περιστροφής και τύποςπου αναπτύχθηκε από την εταιρεία μας, το οποίο μπορεί να εξάγει υψηλής καθαρότητας και υψηλής ποιότητας ολικό RNA από διάφορους ζωικούς ιστούς με υψηλή απόδοση.Η στήλη μόνο με RNA μπορεί να δεσμεύσει αποτελεσματικά το RNA και μπορεί να υποβληθεί σε επεξεργασία ταυτόχρονα με μια μοναδική φόρμουλα Πολλά δείγματα.
Ολόκληρο το σύστημα είναι Χωρίς RNase, έτσι ώστε το εξαγόμενο RNA να μην αποικοδομείται.Ρυθμιστικό διάλυμα RW1, σύστημα πλύσης ρυθμιστικού διαλύματος RW2, έτσι ώστε το λαμβανόμενο RNA να είναι απαλλαγμένο από ρύπανση πρωτεΐνης, DNA, ιόντων και οργανικών ενώσεων.
Εξαρτήματα κιτ
| Animal Total RNA Isolation Kit | ||
| Εξαρτήματα κιτ | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 Τ | 200 Τ | |
| Buffer RL1* | 25 ml | 100 ml |
| Buffer RL2 | 15 ml | 60 ml |
| Buffer RW1* | 25 ml | 100 ml |
| Buffer RW2 | 24 ml | 96 ml |
| Χωρίς RNase ddH2O | 10 ml | 40 ml |
| Στήλη μόνο με RNA | 50 | 200 |
| Στήλη Καθαρισμού DNA | 50 | 200 |
| Εγχειρίδιο οδηγιών | 1 τεμάχιο | 1 τεμάχιο |
Πληροφορίες Προϊόντος
| Μορφή | Στήλη περιστροφής | Συστατικό καθαρισμού | Στήλη Foregene, αντιδραστήριο |
| Ροή | 1-24 δείγματα | Χρόνος ανά προετοιμασία | ~30 λεπτά (24 δείγματα) |
| Φυγόκεντρος | Επιτραπέζια φυγόκεντρος | Διαχωρισμός πυρόλυσης | Φυγοκεντρικός διαχωρισμός |
| Δείγμα | Ζωικός ιστός;κύτταρο | Ποσότητα δειγμάτων | Ιστός: 10-20 mg;Κελλί:(1-5)×106 |
| Όγκος έκλουσης | 50-200 μL | Μέγιστος όγκος φόρτωσης | 850 μL |
Χαρακτηριστικά & πλεονεκτήματα
■ Δεν χρειάζεται να ανησυχείτε για την αποικοδόμηση του RNA.ολόκληρο το σύστημα είναι Χωρίς RNase
■ Αφαιρέστε αποτελεσματικά τη στήλη καθαρισμού DNA που χρησιμοποιεί DNA
■ Αφαιρέστε το DNA χωρίς προσθήκη DNase
■ Απλές-όλες οι λειτουργίες ολοκληρώνονται σε θερμοκρασία δωματίου
■ Η γρήγορη λειτουργία μπορεί να ολοκληρωθεί σε 30 λεπτά
■ Ασφαλές-δεν απαιτείται οργανικό αντιδραστήριο
■ Υψηλής καθαρότητας -OD260/280≈1,8-2,1
Εφαρμογή κιτ
Είναι κατάλληλο για την εκχύλιση και τον καθαρισμό ολικού RNA από μια ποικιλία φρέσκων ή κατεψυγμένων ζωικών ιστών ή καλλιεργημένων κυττάρων.
Παράμετροι προϊόντος
■ Μεταγενέστερες εφαρμογές: σύνθεση cDNA πρώτου κλώνου, RT-PCR, μοριακή κλωνοποίηση, Northern Blot κ.λπ.
■ Δείγματα: ζωικοί ιστοί, καλλιεργημένα κύτταρα
■ Δοσολογία: Ιστοί 10-20mg, Κύτταρα(2-5)×106
■ Μέγιστη ικανότητα δέσμευσης DNA στήλης καθαρισμού: 80 μg
■ Όγκος έκλουσης: 50-200 μl
Διάγραμμα
Animal Total RNA Isolation Kit 20 mg
Φρέσκα δείγματα ποντικού, πάρτε 5% καθαρισμένο ολικό RNA 1% άγαρ
Ηλεκτροφόρηση γλυκογέλης
1: Σπλήνας 2: Νεφρός
3: Ήπαρ 4: Καρδιά
Αποθήκευση και διάρκεια ζωής
Το κιτ μπορεί να αποθηκευτεί για 24 μήνες σε θερμοκρασία δωματίου (15–25 ℃) ή 2–8 ℃ για μεγαλύτερο χρονικό διάστημα.Το ρυθμιστικό διάλυμα RL1 μπορεί να αποθηκευτεί στους 4 ℃ για 1 μήνα μετά την προσθήκη β-μερκαπτοαιθανόλης (προαιρετικό).
Αναφερόμενα άρθρα
1.IF: 18.808:Zheng, Q., Qin, F., Luo, R., et αϊ.Νανοσωματίδια που μοιάζουν με λιπίδια φορτωμένα με mRNA για επεξεργασία της βάσης του ήπατος μέσω της βελτιστοποίησης του κεντρικού σύνθετου σχεδιασμού.Adv.Λειτουργία.Μητήρ.2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.IF:18.187:He X, Hong W, Yang J, et αϊ.Η αυθόρμητη απόπτωση κυττάρων στο θεραπευτικό παρασκεύασμα βλαστοκυττάρων ασκεί ανοσοτροποποιητικά αποτελέσματα μέσω της απελευθέρωσης φωσφατιδυλοσερίνης.Στόχος μεταδόσεως σήματος Ther.2021 14 Ιουλίου 6(1):270.doi: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.IF: 17,97: Dai Z, Liu H, Liao J, et al.Η τροποποίηση του tRNA της Ν7-μεθυλγουανοσίνης ενισχύει τη μετάφραση του ογκογονικού mRNA και προάγει την εξέλιξη του ενδοηπατικού χολαγγειοκαρκίνου.ΜοΙ Cell.2021 Ιουλίου 29:S1097-2765(21)00555-4.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.IF: 9.225: Cao X, Shu Y, Chen Y, et al.Η τροποποίηση m6A με τη μεσολάβηση Mettl14 διευκολύνει την αναγέννηση του ήπατος διατηρώντας την ομοιόσταση του ενδοπλασματικού δικτύου.Cell Mol Gastroenterol Hepatol.2021, 12(2):633-651.doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
Κιτ απομόνωσης RNA για άλλες πηγές δείγματοςείναι διαθέσιμα:
Κύτταρο, φυτό, ιός, αίμα κ.λπ.
Το RNA δεν εκχυλίζεται ή οι αποδόσεις RNA είναι χαμηλές
Υπάρχει συχνά μια ποικιλία παραγόντων που επηρεάζουν την αποτελεσματικότητα ανάκτησης, όπως: η περιεκτικότητα RNA δείγματος ιστού, η μέθοδος λειτουργίας, ο όγκος έκλουσης κ.λπ.
1. Πραγματοποιήθηκε φυγοκέντρηση με παγόλουτρο ή κρυογονική (4 °C) κατά τη λειτουργία.
Σύσταση: Λειτουργήστε σε θερμοκρασία δωματίου (15-25°C) καθ' όλη τη διάρκεια της διαδικασίας, μην κάνετε παγόλουτρο και φυγοκεντρήστε σε χαμηλές θερμοκρασίες.
2. Ακατάλληλη διατήρηση του δείγματος ή υπερβολικός χρόνος αποθήκευσης του δείγματος.
Σύσταση: Αποθηκεύστε τα δείγματα στους -80 °C ή καταψύξτε σε υγρό άζωτο και αποφύγετε την επαναλαμβανόμενη χρήση κατάψυξης-απόψυξης.προσπαθήστε να χρησιμοποιήσετε φρέσκο ιστό ή καλλιεργημένα κύτταρα για εκχύλιση RNA.
3. Ανεπαρκής λύση δείγματος.
Σύσταση: Κατά την ομογενοποίηση ιστού, βεβαιωθείτε ότι ο ιστός είναι επαρκώς ομογενοποιημένος και ότι τα κύτταρα του ιστού είναι επαρκώς διαιρεμένα ώστε να εξηγείται η απελευθέρωση RNA.
4. Το εκλουστικό δεν προστίθεται σωστά.
Σύσταση: Επιβεβαιώστε ότι ddH χωρίς RNase2Το Ο προστίθεται στάγδην στο μέσο της μεμβράνης της στήλης καθαρισμού.
5. Ο σωστός όγκος απόλυτης αιθανόλης δεν προστέθηκε στο ρυθμιστικό διάλυμα RL2 ή στο ρυθμιστικό διάλυμα RW2.
Σύσταση: Ακολουθήστε τις οδηγίες, προσθέστε τον σωστό όγκο απόλυτης αιθανόλης στο Buffer RL2 και στο Buffer RW2 και ανακατέψτε καλά πριν χρησιμοποιήσετε το κιτ.
6. Η δόση του δείγματος ιστού δεν είναι κατάλληλη.
Σύσταση: Χρησιμοποιήστε 10-20 mg ιστού ή (1-5) × 106κύτταρα ανά 500 μl ρυθμιστικού διαλύματος RL1, καθώς η υπερβολική χρήση ιστού μπορεί να οδηγήσει σε μειωμένη εκχύλιση RNA.
7. Ακατάλληλος όγκος έκλουσης ή ατελής έκλουση.
Σύσταση: Ο όγκος έκλουσης της στήλης καθαρισμού είναι 50-200 μl.εάν το αποτέλεσμα έκλουσης δεν είναι ικανοποιητικό, συνιστάται η παράταση του χρόνου τοποθέτησης σε θερμοκρασία δωματίου μετά την προσθήκη προθερμασμένου ddH Χωρίς RNase2O, π.χ. για 5-10 λεπτά.
8. Η στήλη καθαρισμού έχει υπόλειμμα αιθανόλης μετά από πλύση με ρυθμιστικό διάλυμα RW2.
Σύσταση: Εάν υπάρχει υπόλειμμα αιθανόλης μετά την πλύση με ρυθμιστικό διάλυμα RW2, φυγοκέντρηση με άδεια σωλήνα για 1 λεπτό, ο χρόνος για τη λειτουργία φυγοκέντρησης με άδειο σωλήνα μπορεί να αυξηθεί στα 2 λεπτά ή η στήλη καθαρισμού μπορεί να τοποθετηθεί σε θερμοκρασία δωματίου για 5 λεπτά για να αφαιρεθεί επαρκώς η υπολειμματική αιθανόλη.
Το καθαρισμένο RNA αποικοδομείται
Η ποιότητα του καθαρισμένου RNA σχετίζεται με παράγοντες όπως η διατήρηση του δείγματος, η μόλυνση με RNase και ο χειρισμός κ.λπ.
1. Τα δείγματα ιστών δεν διατηρούνται έγκαιρα.
Σύσταση: Εάν δείγματα ιστού ή κύτταρα δεν χρησιμοποιηθούν έγκαιρα μετά τη συλλογή, κρυοσυντηρήστε αμέσως στους -80 °C ή σε υγρό άζωτο.Για να εξαγάγετε RNA, χρησιμοποιήστε ένα δείγμα ιστού ή κυττάρων που μόλις λάβατε όποτε είναι δυνατόν.
2. Επαναλαμβανόμενη κατάψυξη-απόψυξη δειγμάτων ιστού.
Σύσταση: Όταν αποθηκεύετε δείγματα ιστού, είναι καλύτερο να τα κόβετε σε μικρά κομμάτια για συντήρηση και να αφαιρείτε ένα από τα κομμάτια όταν τα χρησιμοποιείτε για να αποφύγετε την επαναλαμβανόμενη κατάψυξη-απόψυξη του δείγματος και την αποικοδόμηση του RNA.
3. Το RNase εισάγεται ή δεν φοράτε γάντια μιας χρήσης, μάσκες κ.λπ. κατά τη διάρκεια της επέμβασης.
Σύσταση: Τα πειράματα εξαγωγής RNA γίνονται καλύτερα σε ξεχωριστούς χώρους χειρισμού RNA και ο πίνακας καθαρίζεται πριν από το πείραμα.
Φοράτε γάντια και μάσκες μιας χρήσης κατά τη διάρκεια του πειράματος για να ελαχιστοποιήσετε την αποικοδόμηση του RNA που προκαλείται από την εισαγωγή της RNase.
4. Τα αντιδραστήρια μολύνονται με RNase κατά τη χρήση.
Σύσταση: Αντικαταστήστε με ένα νέο Animal Total RNA Isolation Kit για σχετικά πειράματα.
5. Οι σωλήνες φυγοκέντρησης, τα άκρα κ.λπ. που χρησιμοποιούνται στον χειρισμό του RNA είναι μολυσμένα με RNase.
Σύσταση: Επιβεβαιώστε ότι οι σωλήνες φυγοκέντρησης, τα άκρα, οι πιπέτες κ.λπ. που χρησιμοποιούνται στην εξαγωγή RNA είναι όλα Χωρίς RNase.
Το καθαρισμένο ληφθέν RNA επηρεάζει τα κατάντη πειράματα
Το RNA που καθαρίζεται από τη στήλη καθαρισμού, εάν τα ιόντα άλατος, η περιεκτικότητα σε πρωτεΐνη είναι πολύ μεγάλη θα επηρεάσει το κατάντη πείραμα, όπως: αντίστροφη μεταγραφή, Northern Blot et al.
1. Το εκλουόμενο RNA έχει υπολείμματα ιόντων άλατος.
Σύσταση: Επιβεβαιώστε ότι ο σωστός όγκος αιθανόλης έχει προστεθεί στο Buffer RW2 και εκτελέστε 2 πλύσεις στη στήλη καθαρισμού στην φυγοκεντρική ταχύτητα που υποδεικνύεται για λειτουργία.Εάν υπάρχει υπόλειμμα ιόντων άλατος, αφήστε τη στήλη καθαρισμού στο ρυθμιστικό διάλυμα RW2 για 5 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου και εκτελέστε φυγοκέντρηση για να μεγιστοποιήσετε την απομάκρυνση της μόλυνσης από αλάτι.
2. Κατάλοιπο αιθανόλης σε εκλουόμενο RNA.
Σύσταση: Επιβεβαιώστε ότι μετά την πλύση του ρυθμιστικού διαλύματος RW2, εκτελέστε τη λειτουργία φυγοκέντρησης σε άδειο σωλήνα με την ταχύτητα φυγοκέντρησης που υποδεικνύεται για λειτουργία, αυξήστε το χρόνο της λειτουργίας φυγοκέντρησης με άδειο σωλήνα σε 2 λεπτά εάν υπάρχει ακόμα υπόλειμμα αιθανόλης ή αφήστε το σε θερμοκρασία δωματίου για 5 λεπτά μετά την φυγοκέντρηση με άδειο σωλήνα για να μεγιστοποιήσετε την απομάκρυνση της φυγοκέντρησης σε άδειο σωλήνα.
