Plant Total RNA Isolation Kit Plus Total RNA Purificaiton Kit για φυτά πλούσια σε πολυσακχαρίτες και πολυφαινόλες
Περιγραφή κιτ:
Αριθμ.Κατ.RE-05021/05022/05024
Για τον καθαρισμό του ολικού RNA από γενικά δείγματα φυτών που περιέχουν συστατικά υψηλής περιεκτικότητας σε πολυσακχαρίτες και πολυφαινόλη.
Γρήγορη εξαγωγή ολικού RNA υψηλής ποιότητας από φυτικά δείγματα με υψηλή περιεκτικότητα σε πολυσακχαρίτες και πολυφαινόλες.
Χωρίς RNase με χρήση στήλης καθαρισμού DNA
Απλή—όλες οι λειτουργίες ολοκληρώνονται σε θερμοκρασία δωματίου
Γρήγορη—η λειτουργία μπορεί να ολοκληρωθεί σε 30 λεπτά
Ασφαλές—δεν χρησιμοποιείται οργανικό αντιδραστήριο 
Προδιαγραφές
50 Προετοιμασίες, 200 Προετοιμασίες
Το κιτ χρησιμοποιεί τη στήλη spin και τον τύπο που αναπτύχθηκε από την Foregene, η οποία μπορεί αποτελεσματικά να εξάγει ολικό RNA υψηλής καθαρότητας και υψηλής ποιότητας από διάφορους φυτικούς ιστούς με υψηλή περιεκτικότητα σε πολυσακχαρίτες ή πολυφαινόλες.Παρέχει τη στήλη DNA-Cleaning που μπορεί εύκολα να αφαιρέσει το γονιδιωματικό DNA από το υπερκείμενο και το κυτταρόλυμα.Η στήλη μόνο με RNA μπορεί να δεσμεύσει αποτελεσματικά το RNA.Το κιτ μπορεί να επεξεργαστεί μεγάλο αριθμό δειγμάτων ταυτόχρονα.
Ολόκληρο το σύστημα δεν περιέχει RNase, επομένως το καθαρισμένο RNA δεν θα αποικοδομηθεί.Το ρυθμιστικό διάλυμα PRW1 και το ρυθμιστικό διάλυμα PRW2 μπορούν να διασφαλίσουν ότι το RNA που λαμβάνεται δεν έχει μολυνθεί από πρωτεΐνες, DNA, ιόντα και οργανικές ενώσεις.
Εξαρτήματα κιτ
| Buffer PSL1, Buffer PS, Buffer PSL2 |
| Ρυθμιστικό διάλυμα PRW1, Ρυθμιστικό διάλυμα PRW2 |
| ddH χωρίς RNase2Ο, Στήλη Καθαρισμού DNA |
| RNA-Μόνο Στήλη |
Χαρακτηριστικά & πλεονεκτήματα
■ Λειτουργία σε θερμοκρασία δωματίου (15-25℃) σε όλη τη διάρκεια της διαδικασίας, χωρίς παγόλουτρο και φυγοκέντρηση χαμηλής θερμοκρασίας.
■ Πλήρες κιτ Χωρίς RNase, δεν χρειάζεται να ανησυχείτε για την αποικοδόμηση του RNA.
■ Ιδιαίτερα κατάλληλο για τον καθαρισμό RNA από φυτικά δείγματα πολυσακχαριτών και πολυφαινολών.
■ Η στήλη καθαρισμού DNA συνδέεται ειδικά με το DNA, έτσι ώστε το κιτ να μπορεί να αφαιρέσει τη μόλυνση του γονιδιωματικού DNA χωρίς την προσθήκη DNase.
■ Υψηλή απόδοση RNA: Μόνο RNA Η στήλη και η μοναδική φόρμουλα μπορούν να καθαρίσουν αποτελεσματικά το RNA.
■ Γρήγορη ταχύτητα: εύκολο στη χρήση και μπορεί να ολοκληρωθεί μέσα σε 30 λεπτά.
■ Ασφάλεια: δεν απαιτείται οργανικό αντιδραστήριο.
■ Υψηλή ποιότητα: Τα καθαρισμένα θραύσματα RNA είναι υψηλής καθαρότητας, απαλλαγμένα από πρωτεΐνες και άλλες ακαθαρσίες και μπορούν να ικανοποιήσουν διάφορες μεταγενέστερες πειραματικές εφαρμογές.
Παράμετροι προϊόντος
■ Μεταγενέστερες εφαρμογές: σύνθεση cDNA πρώτου κλώνου, RT-PCR, μοριακή κλωνοποίηση, Northern Blot κ.λπ.
■ Δείγμα: Νωποί ή κατεψυγμένοι φυτικοί ιστοί από πολυσακχαρίτες και πολυφαινόλες
■ Δοσολογία: 50mg φυτικού ιστού
■ Μέγιστη ικανότητα δέσμευσης RNA στήλης καθαρισμού: 80 μg
■ Όγκος έκλουσης: 50-200 μl
Εφαρμογή κιτ
Είναι κατάλληλο για την εκχύλιση και τον καθαρισμό ολικού RNA από φρέσκα ή κατεψυγμένα δείγματα φυτικού ιστού (ιδιαίτερα φρέσκου ιστού φυτικών φύλλων) με υψηλή περιεκτικότητα σε πολυσακχαρίτες και πολυφαινόλες.
Ροή εργασίας
Διάγραμμα
Το Plant Total RNA Isolation Kit Plus επεξεργάστηκε 50 mg φρέσκων φύλλων πολυσακχαριτών και πολυφαινολών και 5% καθαρισμένο RNA δοκιμάστηκε με ηλεκτροφόρηση.
1: Μπανάνα
2: Γκίνγκο
3: Βαμβάκι
4: Ρόδι
Αποθήκευση και διάρκεια ζωής
Αυτό το κιτ μπορεί να αποθηκευτεί για 24 μήνες σε ξηρές συνθήκες σε θερμοκρασία δωματίου (15-25℃).εάν χρειάζεται να αποθηκευτεί για μεγαλύτερο χρονικό διάστημα, μπορεί να αποθηκευτεί σε θερμοκρασία 2–8℃.
Το ρυθμιστικό διάλυμα PSL1 μπορεί να τοποθετηθεί στους 4 ℃ για 1 μήνα μετά την προσθήκη β-μερκαπτοαιθανόλης (συνιστάται η προσθήκη του την ίδια στιγμή του πειράματος).
Η στήλη βουλώθηκε
Αφού βουλώσει η στήλη, η απόδοση RNA μειώνεται ή ακόμη και αδύνατο να καθαριστεί το RNA και η μάζα RNA που προκύπτει είναι χαμηλή.
Ανάλυση κοινής αιτίας:
1. Τα διαλείμματα δειγμάτων δεν είναι ενδελεχή.
Η θραύση του δείγματος δεν προκαλεί τον πλήρη αποκλεισμό της ΣΤΗΛΗΣ ΚΑΘΑΡΙΣΜΟΥ DNA, ενώ επηρεάζει την απόδοση και την ποιότητα του RNA.Συνιστούμε τη λειτουργία ταχείας λείανσης σε επαρκές υγρό άζωτο όταν σπάσατε τα δείγματα. Προσπαθήστε να συνθλίψετε το κυτταρικό τοίχωμα του δείγματος, την κυτταρική μεμβράνη και άλλους ιστούς.Για δείγματα φυτών πολυσακχαριτών πολυόλης, σας συνιστούμε να χρησιμοποιείτε το Plant Total RNA IOLATION KIT PLUS.
2. Κατά την αναρρόφηση του διαχωρισμένου υπερκείμενου δείγματος με στήλη καθαρισμού DNA, το πιθανό ίζημα τεμαχισμένου κυττάρου μπορεί να εισπνευστεί.
Τα κατακερματισμένα ιζήματα των κυττάρων που λαμβάνονται θα προκαλέσουν τη στήλη ΜΟΝΟ RNA η οποία θα αποκλειστεί όταν εκτελεστεί η λειτουργία προσρόφησης RNA (δείτε το βήμα 6).Σας συνιστούμε να είστε προσεκτικοί όταν αναρροφάτε αυτό το υπερκείμενο υγρό για να αποφύγετε την αναρρόφηση κυτταρικών υπολειμμάτων.
3. Η αρχική ποσότητα του δείγματος είναι υπερβολική.
Η υπερβολική χρήση δείγματος θα έχει ως αποτέλεσμα ατελή κατακερματισμό του δείγματος ή ατελή κυτταρική λύση από το ρυθμιστικό διάλυμα PSL1, με αποτέλεσμα την απόφραξη της στήλης καθαρισμού κατά τη διάρκεια του καθαρισμού.Κιτ απομόνωσης ολικού RNA φυτού Κάθε μεμονωμένο καθαρισμένο λειτουργικό δείγμα είναι 50 mg.Για δείγματα φυτών πολυσακχαριτών πολυόλης, συνιστούμε να δοκιμάσετε το Plant Total RNA IOLATION KIT PLUS.
4. Η θερμοκρασία της φυγόκεντρου είναι πολύ χαμηλή.
Ολόκληρη η διαδικασία απομόνωσης και καθαρισμού RNA πραγματοποιείται σε θερμοκρασία δωματίου (20-25°C), εκτός από το ότι ο ιστός του δείγματος έχει σπάσει από υγρό άζωτο. Η θερμοκρασία ορισμένων κρυογονικών φυγοκεντρητών είναι χαμηλότερη από 20℃, το οποίο μπορεί να προκαλέσει απόφραξη της στήλης καθαρισμού DNA και/ή της στήλης μόνο RNA.Εάν συμβεί αυτό, ρυθμίστε τη θερμοκρασία της φυγοκέντρησης στους 20-25℃, καιβεβαιωθείτε ότι το μείγμα λύσης και/ή το υπερκείμενο που προστέθηκε με αιθανόλη έχει προθερμανθεί στους 37°C.
Δεν έχει εκχυλιστεί RNA ή η απόδοση RNA είναι χαμηλή
Υπάρχουν συνήθως πολλοί παράγοντες που επηρεάζουν την αποτελεσματικότητα ανάκτησης, όπως: η περιεκτικότητα σε δείγμα RNA, η μέθοδος λειτουργίας, ο όγκος έκλουσης κ.λπ.
Ανάλυση κοινών αιτιών ως εξής:
1. Πραγματοποιήθηκε φυγοκέντρηση σε παγόλουτρο ή χαμηλή θερμοκρασία (4°C) κατά τη διάρκεια της επέμβασης.
Πρόταση: Λειτουργήστε σε θερμοκρασία δωματίου (15-25°Γ) σε όλη τη διαδικασία, μην κάνετε παγόλουτρο και φυγοκέντρηση σε χαμηλή θερμοκρασία.
2.Το RNA έχει υποβαθμιστεί λόγω ακατάλληλης συντήρησης του δείγματος ή μακροχρόνιας διατήρησης του δείγματος.
Σύσταση: Τα πρόσφατα συλλεγμένα δείγματα πρέπει να καταψύχονται γρήγορα σε υγρό άζωτο και στη συνέχεια να φυλάσσονται στους -80°C για μεγάλο χρονικό διάστημα, αποφεύγοντας την επαναλαμβανόμενη κατάψυξη και απόψυξη των δειγμάτων.ή εμποτίστε αμέσως τα δείγματα σε διάλυμα σταθεροποιητή RNA RNAlater (δείγματα ζώων).
3. Ανεπαρκής κατακερματισμός και λύση του δείγματος οδηγεί σε απόφραξη της στήλης καθαρισμού.
Πρόταση: Όταν τρίβετε τον ιστό, βεβαιωθείτε ότι το χαρτομάντιλο είναι επαρκώς αλεσμένο και μεταφέρετέ το γρήγορα στο προπαρασκευασμένο Buffer PSL1 (επιβεβαιώστε ότι έχει προστεθεί η σωστή αναλογία β-ΜΕ, βλέπε βήμα 1 της διαδικασίας).
4.Το εκλουστικό προστέθηκε λανθασμένα.
Πρόταση: Βεβαιωθείτε ότι το ddH2O Χωρίς RNase στάζει στη μέση της μεμβράνης της στήλης καθαρισμού.
5. Ο σωστός όγκος απόλυτης αιθανόλης δεν προστέθηκε στο Buffer PSL2 ή στο Buffer PRW2.
Πρόταση: Ακολουθήστε τις οδηγίες, προσθέστε τον σωστό όγκο απόλυτης αιθανόλης στο Buffer PSL2 και στο Buffer PRW2 και ανακατέψτε καλά πριν χρησιμοποιηθεί το κιτ.
6.Η ποσότητα του δείγματος ιστού είναι ακατάλληλη.
Πρόταση: Χρησιμοποιήστε 50 mg ιστού ανά 500 μl ρυθμιστικού διαλύματος PSL1.Η χρήση υπερβολικού ιστού θα μειώσει την ποσότητα του RNA που εξάγεται και η καθαρότητα του προκύπτοντος RNA θα μειωθεί επίσης.Συνιστούμε ανεπιφύλακτα ότι η αρχική δόση δείγματος δεν πρέπει να υπερβαίνει τα 50 mg ανά λειτουργία εκχύλισης RNA.
7.Ακατάλληλος όγκος έκλουσης ή ατελής έκλουση.
Πρόταση: Ο όγκος του διαλύματος έκλουσης της στήλης καθαρισμού είναι 50-200 μl.εάν το αποτέλεσμα έκλουσης δεν είναι ικανοποιητικό, συνιστάται η παράταση του χρόνου σε θερμοκρασία δωματίου μετά την προσθήκη προθερμασμένου ddH2O Χωρίς RNase, όπως 5-10 λεπτά.
8. Η στήλη καθαρισμού έχει υπόλειμμα αιθανόλης μετά από πλύση με BufferPRW2.
Πρόταση: Εάν ο άδειος σωλήνας φυγοκεντρηθεί για 1 λεπτό και υπάρχει ακόμα αιθανόλη μετά το πλύσιμο στο Buffer PRW2, μπορείτε να αυξήσετε το χρόνο φυγοκέντρησης του άδειου σωλήνα στα 2 λεπτά ή να τοποθετήσετε τη στήλη καθαρισμού σε θερμοκρασία δωματίου για 5 λεπτά για να αφαιρέσετε πλήρως την υπολειμματική αιθανόλη.
9.Το κιτ χρησιμοποιήθηκε λανθασμένα.
Πρόταση: Για φυτικά δείγματα πολυφαινολικών πολυσακχαριτών, με τη χρήση κοινών κιτ όπως το Plant Total RNA Isolation Kit ενδέχεται να μην είναι δυνατή η λήψη ιδανικών δειγμάτων RNA.Σας συνιστούμε να χρησιμοποιήσετε το Plant Total RNA IsolationKit Plus, το οποίο είναι ειδικά σχεδιασμένο για φυτικά δείγματα πολυφαινολικού πολυσακχαρίτη.Ένα κιτ ειδικά σχεδιασμένο για την εξαγωγή RNA από δείγματα φυτών πολυφαινόλης και πολυσακχαρίτη.
Η τιμή OD260/OD280 είναι χαμηλή
Η έκλουση RNA με ddH2O και χρησιμοποιείται για μετρήσεις φασματοφωτόμετρου έχει ως αποτέλεσμα χαμηλές τιμές OD260/OD280.Συνιστούμε τη χρήση 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 (αντί για ddH2O Χωρίς RNase για έκλουση RNA) για να λάβετε σχετικά σωστές τιμές OD260/OD280, βλ. «Δοκιμασίες συγκέντρωσης και καθαρισμού RNA» στη σελίδα 19.
Το καθαρισμένο RNA αποικοδομείται
Η ποιότητα του καθαρισμένου RNA σχετίζεται με παράγοντες όπως η διατήρηση του δείγματος, η μόλυνση με RNase και ο χειρισμός.
Ανάλυση κοινών αιτιών:
1. Τα δείγματα ιστών δεν αποθηκεύτηκαν εγκαίρως μετά τη συλλογή.
Σύσταση: Εάν τα δείγματα ιστού δεν χρησιμοποιηθούν εγκαίρως μετά τη συλλογή, αποθηκεύστε τα σε υγρό άζωτο σε χαμηλή θερμοκρασία αμέσως ή μεταφέρετέ τα στους -80°C για μακροχρόνια αποθήκευση μετά από γρήγορη κατάψυξη σε υγρό άζωτο ή βυθίστε αμέσως τα δείγματα σε διάλυμα σταθεροποιητή RNA RNAlater (ζωικά δείγματα ).Για την εξαγωγή RNA, προσπαθήστε να χρησιμοποιήσετε πρόσφατα συλλεγμένα δείγματα ιστού.
2. Επαναλαμβανόμενη κατάψυξη και απόψυξη δειγμάτων ιστού.
Πρόταση: Όταν αποθηκεύετε δείγματα ιστού, είναι καλύτερο να τα κόβετε σε μικρά κομμάτια για συντήρηση και να αφαιρείτε ένα μέρος τους όταν τα χρησιμοποιείτε για να αποφύγετε την υποβάθμιση του RNA που προκαλείται από την επαναλαμβανόμενη κατάψυξη και απόψυξη των δειγμάτων.
3. Η RNase εισάγεται στο χειρουργείο ή δεν φοριούνται γάντια μιας χρήσης, μάσκες κ.λπ.
Πρόταση: Τα πειράματα εξαγωγής RNA εκτελούνται καλύτερα σε ξεχωριστές λειτουργίες RNA και ο εργαστηριακός πίνακας θα πρέπει να καθαρίζεται πριν από το πείραμα και πρέπει να φοράτε γάντια και μάσκες μιας χρήσης κατά τη διάρκεια του πειράματος για να αποφευχθεί η υποβάθμιση του RNA που προκαλείται από την εισαγωγή της RNase στο μέγιστο βαθμό.
4. Το αντιδραστήριο μολύνεται από RNase κατά τη χρήση.
Πρόταση: Αντικαταστήστε με μια νέα σειρά κιτ εξαγωγής ολικού RNA φυτού για σχετικά πειράματα.
5. Οι σωλήνες φυγοκέντρησης και τα άκρα της πιπέτας που χρησιμοποιούνται για τον χειρισμό του RNA είναι μολυσμένα με RNase.
Πρόταση: Βεβαιωθείτε ότι οι σωλήνες φυγοκέντρησης, τα άκρα της πιπέτας, οι πιπέτες κ.λπ. που χρησιμοποιούνται στην εξαγωγή RNA είναι όλα Χωρίς RNase.
Εγχειρίδια οδηγιών:
Εγχειρίδιο οδηγιών Plant Total RNA Isolation Kit Plus
