Cell Direct RT qPCR Kit—SYBR GREEN I Direct Cell Lysis Cell Ready One-step qRT-PCR Kits
Περιγραφές
Αυτό το κιτ χρησιμοποιεί ένα μοναδικό σύστημα ρυθμιστικού διαλύματος λύσης που μπορεί να απελευθερώσει γρήγορα RNA από δείγματα καλλιεργημένων κυττάρων για αντιδράσεις RT-qPCR, εξαλείφοντας έτσι τη χρονοβόρα και επίπονη διαδικασία καθαρισμού RNA.Το πρότυπο RNA μπορεί να ληφθεί σε μόλις 7 λεπτά.Το 5×Απευθείας RT Mix και 2×Τα άμεσα αντιδραστήρια qPCR Mix-SYBR που παρέχονται από το κιτ μπορούν να λάβουν γρήγορα και αποτελεσματικά ποσοτικά αποτελέσματα PCR σε πραγματικό χρόνο.
5×Απευθείας RT Mix και 2×Το Direct qPCR Mix-SYBR έχει ισχυρή ανοχή σε αναστολέα και το προϊόν λύσης των δειγμάτων μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως πρότυπο για RT-qPCR απευθείας.Αυτό το κιτ περιέχει τη μοναδική αντίστροφη μεταγραφάση Foregene υψηλής συγγένειας RNA και την Hot D-Taq DNA πολυμεράση, dNTPs, MgCl2, ρυθμιστικό διάλυμα αντίδρασης, βελτιστοποιητής PCR και σταθεροποιητής.
Προδιαγραφές
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Εξαρτήματα κιτ
| Μέρος Ι | Ρυθμιστικό διάλυμα CL |
| Foregene Protease Plus II | |
| Ρυθμιστικό διάλυμα ST | |
| Μέρος II | Γόμα DNA |
| 5× Άμεση RT Mix | |
| 2× Direct qPCR Mix-SYBR | |
| Βαφή αναφοράς 50× ROX | |
| Χωρίς RNase ddH2O | |
| Οδηγίες | |
Χαρακτηριστικά & πλεονεκτήματα
■Απλό και αποτελεσματικό: με την τεχνολογία Cell Direct RT, τα δείγματα RNA μπορούν να ληφθούν σε μόλις 7 λεπτά.
■ Η ζήτηση δείγματος είναι μικρή, καθώς μπορούν να ελεγχθούν έως και 10 κύτταρα.
■ Υψηλή απόδοση: μπορεί να ανιχνεύσει γρήγορα RNA σε κύτταρα που έχουν καλλιεργηθεί σε πλάκες 384, 96, 24, 12, 6 φρεατίων.
■ Η γόμα DNA μπορεί να αφαιρέσει γρήγορα τα απελευθερωμένα γονιδιώματα, μειώνοντας σημαντικά τον αντίκτυπο στα επόμενα πειραματικά αποτελέσματα.
■ Το βελτιστοποιημένο σύστημα RT και qPCR καθιστά την αντίστροφη μεταγραφή δύο σταδίων RT-PCR πιο αποτελεσματική και την PCR πιο συγκεκριμένη και πιο ανθεκτική στους αναστολείς αντίδρασης RT-qPCR.
Εφαρμογή κιτ
Πεδίο εφαρμογής: καλλιεργημένα κύτταρα.
- RNA που απελευθερώνεται με λύση δείγματος: ισχύει μόνο για το πρότυπο RT-qPCR αυτού του κιτ.
- Το κιτ μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τους ακόλουθους σκοπούς: ανάλυση γονιδιακής έκφρασης, επαλήθευση του αποτελέσματος σίγησης γονιδίου που προκαλείται από το siRNA, έλεγχος φαρμάκων κ.λπ.
Διάγραμμα
Αποθήκευση και διάρκεια ζωής
Το μέρος I αυτού του κιτ θα πρέπει να φυλάσσεται στους 4℃.Το Μέρος II πρέπει να αποθηκεύεται στους -20℃.
Το Foregene Protease Plus II θα πρέπει να φυλάσσεται στους 4℃, μην παγώνετε στους -20℃.
Αντιδραστήριο 2×Το Direct qPCR Mix-SYBR θα πρέπει να φυλάσσεται στους -20℃στο σκοτάδι;εάν χρησιμοποιείται συχνά, μπορεί επίσης να αποθηκευτεί στο 4℃ για βραχυπρόθεσμη αποθήκευση (χρήση εντός 10 ημερών).
Αρχές σχεδίασης εκκινητών PCR σε πραγματικό χρόνο
Forward Primer και Reverse Primer
Για Real Time PCR, ο σχεδιασμός του εκκινητή είναι πολύ σημαντικός.Οι εκκινητές σχετίζονται με την ειδικότητα και την αποτελεσματικότητα της ενίσχυσης PCR και μπορούν να σχεδιαστούν με αναφορά στις ακόλουθες αρχές:
Μήκος ασταριού: 18-30bp.
Περιεκτικότητα GC: 40-60%.
Τιμή Tm: Το λογισμικό σχεδιασμού Primer, όπως το Primer 5, μπορεί να δώσει την τιμή Tm του αστάρι.Οι τιμές Tm των εκκινητών ανάντη και κατάντη θα πρέπει να είναι όσο το δυνατόν πιο κοντά.Μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί ο τύπος υπολογισμού Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Κατά την εκτέλεση PCR, ως θερμοκρασία ανόπτησης επιλέγεται γενικά μια θερμοκρασία κάτω από την τιμή Tm εκκινητή των 5 °C (η αντίστοιχη αύξηση στη θερμοκρασία ανόπτησης μπορεί να αυξήσει την ειδικότητα της αντίδρασης PCR).
Primers και προϊόντα PCR:
Το μήκος του προϊόντος ενίσχυσης PCR εκκινητή σχεδιασμού είναι κατά προτίμηση 100-150 bp.
Τα αστάρια σχεδιασμού στη δευτερεύουσα δομική περιοχή του προτύπου θα πρέπει να αποφεύγονται όσο το δυνατόν περισσότερο.
Αποφύγετε το σχηματισμό 2 ή περισσότερων συμπληρωματικών βάσεων μεταξύ των 3' άκρων των ανάντη και κατάντη εκκινητών.
Δεν μπορεί να υπάρχει τερματική βάση αστάρι 3′ με 3 επιπλέον διαδοχικά G ή C.
Οι ίδιοι οι εκκινητές δεν μπορούν να έχουν συμπληρωματικές δομές, διαφορετικά θα σχηματιστεί μια δομή φουρκέτας, επηρεάζοντας την ενίσχυση PCR.
Το ATCG θα πρέπει να κατανέμεται όσο το δυνατόν πιο ομοιόμορφα στην αλληλουχία εκκινητών και η 3' τερματική βάση θα πρέπει να αποφεύγεται ως T.
Παράρτημα 1：Cell Direct RT-qPCR κιτ συμπληρωμάτων συσκευασίας
1.Διάλυμα λύσης κυττάρων
|
| |||
| Εξαρτήματα κιτ (σύστημα λύσης 24 φρεατίων / φρεάτιο) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 Τ | 500 Τ | ||
| ΜέροςΕγώ | Ρυθμιστικό διάλυμα CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Ρυθμιστικό διάλυμα ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| ΜέροςII | Γόμα DNA | 400 μl | 1 ml × 2 |
2.RT Mix
|
| |
| Εξαρτήματα κιτ (20 μl σύστημα αντίδρασης) | DRT-01011-B1 |
| 200 Τ | |
| 5× Άμεση RT Mix | 800 μl |
| ddH χωρίς RNase2O | 1,7 ml × 2 |
|
| ||
| Εξαρτήματα κιτ (20 μl σύστημα αντίδρασης) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 Τ | 1000 Τ | |
| 2× Direct qPCR Mix-SYBR | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| Βαφή αναφοράς 50× ROX | 40 μl | 200 μl |
| ddH χωρίς RNase2O | 1,7 ml | 10 ml |
Εγχειρίδια οδηγιών:
