Κιτ QuickEasy Cell Direct RT-qPCR (96 φρεατίων) – SYBR Green I
Περιγραφές
ο(96-πηγάδια) QuickEasyTM Κιτ Cell Direct RT-qPCR–SYBR Green Iπαρέχειένα μοναδικό ρυθμιστικό σύστημα λύσηςto απελευθερώνει γρήγορα RNAαπό καλλιεργημένο κύτταροδείγματα για αντιδράσεις RT-qPCR, εξαλείφοντας τις χρονοβόρες και επίπονεςΔιαδικασία καθαρισμού RNA και διαρκεί μόνο 7 λεπτά για να ληφθεί το απαιτούμενο πρότυπο RNA.ο5× Άμεση RT Mixκαι2× Direct qPCR Mix-SYBRπου παρέχεται στο κουτί μπορεί γρήγορα καινα αποκτήσετε αποτελεσματικά ποσοτικά σε πραγματικό χρόνοΑποτελέσματα PCR.
Το 5× Direct RT Mix και το 2× Direct qPCR Mix-SYBR έχουν ισχυρή ανοχή σε αναστολέα και μπορούν να χρησιμοποιήσουν το προϊόν λύσης του δείγματος που πρόκειται να δοκιμαστεί ως πρότυπο για αποτελεσματική αντίστροφη μεταγραφή και ειδική ενίσχυση.Το αντιδραστήριο περιέχει τη μοναδική Foregene Reverse Transcriptase με υψηλή συγγένεια για το RNA, καθώς και Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl2 , ρυθμιστικό διάλυμα αντίδρασης, βελτιστοποιητής PCR και σταθεροποιητής, και μπορεί να χρησιμοποιηθεί σε συνδυασμό με το ρυθμιστικό διάλυμα λύσης για την ανίχνευση του δείγματος γρήγορα, εύκολα και με ακρίβεια, και έχει τα χαρακτηριστικά της υψηλής ευαισθησίας, της ισχυρής ειδικότητας και της καλής σταθερότητας.
Το κιτ στοχεύει στη λύση μικροσυστήματος καλλιεργημένων κυττάρων 96 φρεατίων και έχει καλή ομοιομορφία και συνοχή.Τα συστατικά του κιτ παρέχουν 96 αντιδράσεις λύσης, 96 αντιδράσεις αντίστροφης μεταγραφής και αντιδράσεις 96×2 qPCR, οι οποίες μπορούν να συναντήσουν την πλάκα κυττάρων 96 φρεατίων για μία φορά, αποφεύγοντας τη ρύπανση που προκαλείται από το επαναλαμβανόμενο άνοιγμα, πάγωμα και απόψυξη των αντιδραστηρίων και την υποβάθμιση της απόδοσης του αντιδραστηρίου.
Εξαρτήματα κιτ
| Σύνθεση κιτ ( 50 μΣύστημα λύσης L/20 μLRT σύστημα αντίδρασης /20μΣύστημα αντίδρασης L qPCR) | DRT-03011 | Παρατήρηση | |
| 96Τ | |||
| ΜέροςI | ΡυθμιστήςCL | 5 mL | ΚύτταροΛύσης |
| ForegeneProtease Plus II | 100 μL | ||
| ΡυθμιστήςST | 500 μL | ||
| Μέρος II | DNAΓόμα | 100 μL | |
| 5× Άμεση RT Mix | 400 μL | RT | |
| 2× Direct qPCR Mix-SYBR | 1 μL × 2 | qPCR | |
| Βαφή αναφοράς 50× ROX | 400µL | ||
| RNase- ΕλεύθεροςddH2 O | 1,7 mL |
| |
| Mετήσια | 1 κομμάτι | 1 μερίδα | |
*: Το αντιδραστήριο λύσης DNA Eraser περιλαμβάνεται στο Μέρος II του κιτ.Τα στοιχεία Cell Lysis, RT και qPCR μπορούν να αγοραστούν ξεχωριστά.
Χαρακτηριστικά & πλεονεκτήματα
■Απλό και αποτελεσματικό: με την τεχνολογία Cell Direct RT, τα δείγματα RNA μπορούν να ληφθούν σε μόλις 7 λεπτά.
■ Η ζήτηση δείγματος είναι μικρή, καθώς μπορούν να ελεγχθούν έως και 10 κύτταρα.
■ Υψηλή απόδοση: μπορεί να ανιχνεύσει γρήγορα RNA σε κύτταρα που έχουν καλλιεργηθεί σε πλάκες 384, 96, 24, 12, 6 φρεατίων.
■ Η γόμα DNA μπορεί να αφαιρέσει γρήγορα τα απελευθερωμένα γονιδιώματα, μειώνοντας σημαντικά τον αντίκτυπο στα επόμενα πειραματικά αποτελέσματα.
■ Το βελτιστοποιημένο σύστημα RT και qPCR καθιστά την αντίστροφη μεταγραφή δύο σταδίων RT-PCR πιο αποτελεσματική και την PCR πιο συγκεκριμένη και πιο ανθεκτική στους αναστολείς αντίδρασης RT-qPCR.
Εφαρμογή κιτ
Πεδίο εφαρμογής: καλλιεργημένα κύτταρα.
- RNA που απελευθερώνεται με λύση δείγματος: ισχύει μόνο για το πρότυπο RT-qPCR αυτού του κιτ.
- Το κιτ μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τους ακόλουθους σκοπούς: ανάλυση γονιδιακής έκφρασης, επαλήθευση του αποτελέσματος σίγησης γονιδίου που προκαλείται από το siRNA, έλεγχος φαρμάκων κ.λπ.
Αποθήκευση και διάρκεια ζωής
Το μέρος I αυτού του κιτ θα πρέπει να αποθηκευτεί στο 4℃;Το Μέρος II πρέπει να αποθηκεύεται στους -20℃.
Το Foregene Protease Plus II θα πρέπει να φυλάσσεται στους 4℃, μην παγώνετε στους -20℃.
Αντιδραστήριο 2×Το Direct qPCR Mix-Taqman θα πρέπει να φυλάσσεται στους -20℃στο σκοτάδι;εάν χρησιμοποιείται συχνά, μπορεί επίσης να αποθηκευτεί στο 4℃ για βραχυπρόθεσμη αποθήκευση (χρήση εντός 10 ημερών).
Αρχές σχεδίασης εκκινητών PCR σε πραγματικό χρόνο
Forward Primer και Reverse Primer
Για Real Time PCR, ο σχεδιασμός του εκκινητή είναι πολύ σημαντικός.Οι εκκινητές σχετίζονται με την ειδικότητα και την αποτελεσματικότητα της ενίσχυσης PCR και μπορούν να σχεδιαστούν με αναφορά στις ακόλουθες αρχές:
- Μήκος ασταριού: 18-30bp.
- Περιεκτικότητα GC: 40-60%.
- Τιμή Tm: Το λογισμικό σχεδιασμού Primer, όπως το Primer 5, μπορεί να δώσει την τιμή Tm του αστάρι.Οι τιμές Tm των εκκινητών ανάντη και κατάντη θα πρέπει να είναι όσο το δυνατόν πιο κοντά.Μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί ο τύπος υπολογισμού Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Κατά την εκτέλεση PCR, ως θερμοκρασία ανόπτησης επιλέγεται γενικά μια θερμοκρασία κάτω από την τιμή Tm εκκινητή των 5 °C (η αντίστοιχη αύξηση στη θερμοκρασία ανόπτησης μπορεί να αυξήσει την ειδικότητα της αντίδρασης PCR).
- Primers και προϊόντα PCR:
- Το μήκος του προϊόντος ενίσχυσης PCR εκκινητή σχεδιασμού είναι κατά προτίμηση 100-150 bp.
- Τα αστάρια σχεδιασμού στη δευτερεύουσα δομική περιοχή του προτύπου θα πρέπει να αποφεύγονται όσο το δυνατόν περισσότερο.
- Αποφύγετε το σχηματισμό 2 ή περισσότερων συμπληρωματικών βάσεων μεταξύ των 3' άκρων των ανάντη και κατάντη εκκινητών.
- Δεν μπορεί να υπάρχει τερματική βάση αστάρι 3′ με 3 επιπλέον διαδοχικά G ή C.
- Οι ίδιοι οι εκκινητές δεν μπορούν να έχουν συμπληρωματικές δομές, διαφορετικά θα σχηματιστεί μια δομή φουρκέτας, επηρεάζοντας την ενίσχυση PCR.
- Το ATCG θα πρέπει να κατανέμεται όσο το δυνατόν πιο ομοιόμορφα στην αλληλουχία εκκινητών και η 3' τερματική βάση θα πρέπει να αποφεύγεται ως T.
παράρτημα1: Γell DirectRT-qPCR Εξάρτημα κιτt πακέτο συμπληρωμάτων
1.Διάλυμα κυτταρικής λύσης
| Διάλυμα λύσης κυττάρων | |||
| Εξαρτήματα κιτ (σύστημα λύσης 24 φρεατίων / φρεάτιο) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 Τ | 500 Τ | ||
| ΜέροςΕγώ | Ρυθμιστικό διάλυμα CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Ρυθμιστικό διάλυμα ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| ΜέροςII | Γόμα DNA | 400 μl | 1 ml × 2 |
| Μίγμα RT | |
| Εξαρτήματα κιτ (20 μl σύστημα αντίδρασης) | DRT-01011-B1 |
| 200 Τ | |
| 5× Άμεση RT Mix | 800 μl |
| ddH χωρίς RNase2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR Mix | ||
| Εξαρτήματα κιτ (20 μl σύστημα αντίδρασης) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 Τ | 1000 Τ | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× Βαφή αναφοράς ROX | 40 μl | 200 μl |
| ddH χωρίς RNase2O | 1,7 ml | 10 ml |
Εγχειρίδια οδηγιών:
