Cell Direct RT qPCR Kit—Taqman Direct Cell Lysis Cell Ready One-step qRT-PCR Kits Probe
Περιγραφές
Αυτό το προϊόν χρησιμοποιεί ένα μοναδικό σύστημα ρυθμιστικού διαλύματος λύσης για γρήγορη απελευθέρωση RNA από δείγματα καλλιεργημένων κυττάρων για αντιδράσεις RT-qPCR, εξαλείφοντας τη χρονοβόρα και επίπονη διαδικασία καθαρισμού RNA και μόνο 7 λεπτά για να ληφθεί το απαιτούμενο πρότυπο RNA, με τα αποτελέσματα 5× Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman που παρέχονται γρήγορα και αποτελεσματικά από το kit.
Το 5× Direct RT Mix και το 2× Direct qPCR Mix-Taqman έχουν ισχυρή ανοχή σε αναστολέα και μπορεί να εκτελέσει αποτελεσματική αναστροφή και ειδική ενίσχυση χρησιμοποιώντας το προϊόν λύσης του δείγματος που θα μετρηθεί ως πρότυπο.Το αντιδραστήριο περιέχει Foregene Reverse Transcriptase, Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl2, Reaction Buffer, PCR Optimizer and Stabilizer, το οποίο μπορεί να χρησιμοποιηθεί με το ρυθμιστικό λύσης για γρήγορη και εύκολη ανίχνευση δειγμάτων και έχει τα χαρακτηριστικά υψηλής ευαισθησίας, ειδικότητας και σταθερότητας.
Προδιαγραφές
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Εξαρτήματα κιτ
| QuickEasyTMCell Direct RT-qPCR Kit-Taqman | ||||
| Εξαρτήματα κιτ 20μl qPCR Reaction System | DRT-01021 | DRT-01022 | Σημείωση | |
| 200 Τ | 1000 Τ | |||
|
Μέρος I | Ρυθμιστικό διάλυμα CL | 4 ml | 20 ml | Κυτταρική Λύση |
| Foregene Protease Plus II | 80 μl | 400 μl | ||
| Ρυθμιστικό διάλυμα ST | 400 μl | 1 ml × 2 | ||
|
Μέρος II | Γόμα DNA | 80 μl | 400 μl | |
| 5× Direct Mix RT * | 160 μl | 800 μl | RT | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman * | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 | qPCR | |
| Βαφή αναφοράς 20×ROX | 40 μl | 200 μl | ||
| ddH χωρίς RNase2O | 1,7 ml | 10 ml | ||
| Εγχειρίδιο οδηγιών | 1 τεμάχιο | 1 τεμάχιο | ||
*:Το Cell Lysis, 5×Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman μπορεί να αγοραστεί ξεχωριστά
Χαρακτηριστικά & πλεονεκτήματα
■Απλό και αποτελεσματικό: με την τεχνολογία Cell Direct RT, τα δείγματα RNA μπορούν να ληφθούν σε μόλις 7 λεπτά.
■ Η ζήτηση δείγματος είναι μικρή, καθώς μπορούν να ελεγχθούν έως και 10 κύτταρα.
■ Υψηλή απόδοση: μπορεί να ανιχνεύσει γρήγορα RNA σε κύτταρα που έχουν καλλιεργηθεί σε πλάκες 384, 96, 24, 12, 6 φρεατίων.
■ Η γόμα DNA μπορεί να αφαιρέσει γρήγορα τα απελευθερωμένα γονιδιώματα, μειώνοντας σημαντικά τον αντίκτυπο στα επόμενα πειραματικά αποτελέσματα.
■ Το βελτιστοποιημένο σύστημα RT και qPCR καθιστά την αντίστροφη μεταγραφή δύο σταδίων RT-PCR πιο αποτελεσματική και την PCR πιο συγκεκριμένη και πιο ανθεκτική στους αναστολείς αντίδρασης RT-qPCR.
Εφαρμογή κιτ
Πεδίο εφαρμογής: καλλιεργημένα κύτταρα.
- RNA που απελευθερώνεται με λύση δείγματος: ισχύει μόνο για το πρότυπο RT-qPCR αυτού του κιτ.
- Το κιτ μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τους ακόλουθους σκοπούς: ανάλυση γονιδιακής έκφρασης, επαλήθευση του αποτελέσματος σίγησης γονιδίου που προκαλείται από το siRNA, έλεγχος φαρμάκων κ.λπ.
Αποθήκευση και διάρκεια ζωής
Το μέρος I αυτού του κιτ θα πρέπει να αποθηκευτεί στο 4℃;Το Μέρος II πρέπει να αποθηκεύεται στους -20℃.
Το Foregene Protease Plus II θα πρέπει να φυλάσσεται στους 4℃, μην παγώνετε στους -20℃.
Αντιδραστήριο 2×Το Direct qPCR Mix-Taqman θα πρέπει να φυλάσσεται στους -20℃στο σκοτάδι;εάν χρησιμοποιείται συχνά, μπορεί επίσης να αποθηκευτεί στο 4℃ για βραχυπρόθεσμη αποθήκευση (χρήση εντός 10 ημερών).
Αρχές σχεδίασης εκκινητών PCR σε πραγματικό χρόνο
Forward Primer και Reverse Primer
Για Real Time PCR, ο σχεδιασμός του εκκινητή είναι πολύ σημαντικός.Οι εκκινητές σχετίζονται με την ειδικότητα και την αποτελεσματικότητα της ενίσχυσης PCR και μπορούν να σχεδιαστούν με αναφορά στις ακόλουθες αρχές:
- Μήκος ασταριού: 18-30bp.
- Περιεκτικότητα GC: 40-60%.
- Τιμή Tm: Το λογισμικό σχεδιασμού Primer, όπως το Primer 5, μπορεί να δώσει την τιμή Tm του αστάρι.Οι τιμές Tm των εκκινητών ανάντη και κατάντη θα πρέπει να είναι όσο το δυνατόν πιο κοντά.Μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί ο τύπος υπολογισμού Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Κατά την εκτέλεση PCR, ως θερμοκρασία ανόπτησης επιλέγεται γενικά μια θερμοκρασία κάτω από την τιμή Tm εκκινητή των 5 °C (η αντίστοιχη αύξηση στη θερμοκρασία ανόπτησης μπορεί να αυξήσει την ειδικότητα της αντίδρασης PCR).
- Primers και προϊόντα PCR:
- Το μήκος του προϊόντος ενίσχυσης PCR εκκινητή σχεδιασμού είναι κατά προτίμηση 100-150 bp.
- Τα αστάρια σχεδιασμού στη δευτερεύουσα δομική περιοχή του προτύπου θα πρέπει να αποφεύγονται όσο το δυνατόν περισσότερο.
- Αποφύγετε το σχηματισμό 2 ή περισσότερων συμπληρωματικών βάσεων μεταξύ των 3' άκρων των ανάντη και κατάντη εκκινητών.
- Δεν μπορεί να υπάρχει τερματική βάση αστάρι 3′ με 3 επιπλέον διαδοχικά G ή C.
- Οι ίδιοι οι εκκινητές δεν μπορούν να έχουν συμπληρωματικές δομές, διαφορετικά θα σχηματιστεί μια δομή φουρκέτας, επηρεάζοντας την ενίσχυση PCR.
- Το ATCG θα πρέπει να κατανέμεται όσο το δυνατόν πιο ομοιόμορφα στην αλληλουχία εκκινητών και η 3' τερματική βάση θα πρέπει να αποφεύγεται ως T.
παράρτημα1: Γell DirectRT-qPCR Εξάρτημα κιτt πακέτο συμπληρωμάτων
1.Διάλυμα κυτταρικής λύσης
| Διάλυμα λύσης κυττάρων | |||
| Εξαρτήματα κιτ (σύστημα λύσης 24 φρεατίων / φρεάτιο) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 Τ | 500 Τ | ||
| ΜέροςΕγώ | Ρυθμιστικό διάλυμα CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Ρυθμιστικό διάλυμα ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| ΜέροςII | Γόμα DNA | 400 μl | 1 ml × 2 |
| Μίγμα RT | |
| Εξαρτήματα κιτ (20 μl σύστημα αντίδρασης) | DRT-01011-B1 |
| 200 Τ | |
| 5× Άμεση RT Mix | 800 μl |
| ddH χωρίς RNase2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR Mix | ||
| Εξαρτήματα κιτ (20 μl σύστημα αντίδρασης) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 Τ | 1000 Τ | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× Βαφή αναφοράς ROX | 40 μl | 200 μl |
| ddH χωρίς RNase2O | 1,7 ml | 10 ml |
Εγχειρίδια οδηγιών:
