Κιτ απομόνωσης στοματικού επιχρίσματος/κάρτας FTA Κιτ εξαγωγής ή καθαρισμού γονιδιωματικού DNA από στοματικά επιχρίσματα
Περιγραφή κιτ:
Καθαρίστε γρήγορα γονιδιωματικό DNA υψηλής ποιότητας από δείγματα στοματικού επιχρίσματος/κάρτας FTA.
◮Χωρίς μόλυνση με RNase:Η στήλη DNA-Only που παρέχεται από το κιτ καθιστά δυνατή την αφαίρεση του RNA από το γονιδιωματικό DNA χωρίς προσθήκη RNase κατά τη διάρκεια του πειράματος, αποτρέποντας τη μόλυνση του εργαστηρίου από εξωγενή RNase.
◮Γρήγορη ταχύτητα:Η πρωτεάση Foregene έχει υψηλότερη δραστικότητα από παρόμοιες πρωτεάσες και αφομοιώνει τα δείγματα ιστών γρήγορα.η επέμβαση είναι απλή και η διαδικασία εξαγωγής γονιδιωματικού DNA μπορεί να ολοκληρωθεί μέσα σε 20-80 λεπτά.
◮Βολικός:Η φυγοκέντρηση πραγματοποιείται σε θερμοκρασία δωματίου και δεν υπάρχει ανάγκη για φυγοκέντρηση σε χαμηλή θερμοκρασία 4°C ή καθίζηση με αιθανόλη του DNA.
◮Ασφάλεια:Δεν απαιτείται εκχύλιση οργανικού αντιδραστηρίου.
◮Υψηλή ποιότητα:Το εξαγόμενο γονιδιωματικό DNA έχει μεγάλα θραύσματα, χωρίς RNA, χωρίς RNase και εξαιρετικά χαμηλή περιεκτικότητα σε ιόντα, τα οποία μπορούν να ικανοποιήσουν τις απαιτήσεις διαφόρων πειραμάτων.
◮Σύστημα μικροέκλουσης:Μπορεί να αυξήσει τη συγκέντρωση του γονιδιωματικού DNA, κάτι που είναι βολικό για ανίχνευση ή πείραμα κατάντη.
Περιγραφή
Αυτό το κιτ παρέχει μια αποτελεσματική και γρήγορη μέθοδο λήψης γονιδιωματικού DNA υψηλής συγκέντρωσης από στοματικά επιχρίσματα και FTA Card (κηλίδες αίματος).Χρησιμοποιώντας την εταιρεία μας'Η μοναδική στήλη και ο τύπος περιστροφής μεμβράνης πυριτίου μόνο για DNA, σε συνδυασμό με την πρωτεάση Foregene, γονιδιωματικό DNA υψηλής συγκέντρωσης και ποιότητας μπορεί να εξαχθεί σε 80 λεπτά.Η ειδικά σχεδιασμένη μικρή στήλη καθαρισμού δεσμεύει το γονιδιωματικό DNA και το DNA μπορεί να εκλουσθεί με μικρή ποσότητα (15μl) σύστημα έκλουσης για την αύξηση της συγκέντρωσης του ληφθέντος γονιδιωματικού DNA, το οποίο είναι βολικό για ανίχνευση ή πείραμα κατάντη.Το κιτ μπορεί να επεξεργάζεται ένα ή περισσότερα δείγματα κάθε φορά και η διαδικασία καθαρισμού δεν απαιτεί εκχύλιση οργανικών ουσιών όπως φαινόλη, χλωροφόρμιο και χρονοβόρα κατακρήμνιση ισοπροπανόλης ή αιθανόλης και η λειτουργία είναι απλή και εξοικονομεί χρόνο.
Προδιαγραφές
50 Προετοιμασίες
Εξαρτήματα κιτ
| Ρυθμιστικό διάλυμα ST1 |
| Ρυθμιστικό διάλυμα ST2 |
| Γραμμικό Ακρυλαμίδιο |
| Buffer PW |
| Buffer WB |
| Buffer EB |
| Foregene Protease |
| DNA-Μόνο Στήλη |
| Οδηγίες |
Χαρακτηριστικά & πλεονεκτήματα
-Χωρίς μόλυνση με RNase: Η στήλη DNA-Only που παρέχεται από το κιτ καθιστά δυνατή την αφαίρεση RNA από το γονιδιωματικό DNA χωρίς προσθήκη RNase κατά τη διάρκεια του πειράματος, αποφεύγοντας τη μόλυνση του εργαστηρίου από εξωγενή RNase.
-Γρήγορη ταχύτητα: Η πρωτεάση Foregene έχει υψηλότερη δραστηριότητα από παρόμοιες πρωτεάσες, αφομοιώνει τα δείγματα γρήγορα.απλή λειτουργία.
-Βολικό: Η φυγοκέντρηση πραγματοποιείται σε θερμοκρασία δωματίου και δεν υπάρχει ανάγκη για φυγοκέντρηση σε χαμηλή θερμοκρασία 4°C ή καθίζηση με αιθανόλη του DNA.
-Ασφάλεια: Δεν απαιτείται εκχύλιση οργανικού αντιδραστηρίου.
-Υψηλή ποιότητα: Το εξαγόμενο γονιδιωματικό DNA έχει μεγάλα θραύσματα, χωρίς RNA, χωρίς RNase και εξαιρετικά χαμηλή περιεκτικότητα σε ιόντα, τα οποία μπορούν να ικανοποιήσουν τις απαιτήσεις διαφόρων πειραμάτων.
-Σύστημα μικροέκλουσης: Μπορεί να αυξήσει τη συγκέντρωση του γονιδιωματικού DNA, το οποίο είναι βολικό για ανίχνευση ή πείραμα κατάντη.
Εφαρμογή κιτ
Είναι κατάλληλο για καθαρισμό γονιδιωματικού DNA από τα ακόλουθα δείγματα: στοματικά επιχρίσματα, FTA Card (κηλίδες αίματος).
Αποθήκευση και διάρκεια ζωής
-Αυτό το κιτ μπορεί να αποθηκευτεί για 12 μήνες σε ξηρές συνθήκες σε θερμοκρασία δωματίου (15-25°C).εάν χρειάζεται να αποθηκευτεί για μεγαλύτερο χρονικό διάστημα, μπορεί να αποθηκευτεί στους 2-8°C.
Σημείωση: Εάν φυλάσσεται σε χαμηλή θερμοκρασία, το διάλυμα είναι επιρρεπές σε καθίζηση.Πριν από τη χρήση, βεβαιωθείτε ότι έχετε τοποθετήσει το διάλυμα στο κιτ σε θερμοκρασία δωματίου για κάποιο χρονικό διάστημα.Εάν είναι απαραίτητο, προθερμάνετε το σε υδατόλουτρο 37°C για 10 λεπτά για να διαλυθεί το ίζημα και ανακατέψτε το πριν τη χρήση.
-Το διάλυμα Foregene Protease έχει μια μοναδική φόρμουλα, η οποία είναι ενεργή όταν φυλάσσεται σε θερμοκρασία δωματίου για μεγάλο χρονικό διάστημα (3 μήνες).Η δραστικότητα και η σταθερότητά του θα είναι καλύτερη όταν φυλάσσεται στους 4°C, γι' αυτό συνιστάται να φυλάσσεται στους 4°C, θυμηθείτε να μην το διατηρείτε στους -20°C.
Η στήλη καθαρισμού είναι βουλωμένη
Σε αυτό το κιτ, στη λειτουργία εκχύλισης γονιδιωματικού DNA, η στήλη καθαρισμού προσροφάται απευθείας στο μίγμα ενζυματικής λύσης του δείγματος χωρίς στάδιο φυγοκέντρησης και η στήλη καθαρισμού μπορεί να αποκλειστεί λόγω ατελούς ενζυμοποίησης και υψηλού ιξώδους του δείγματος.
Οι ακόλουθες πιθανές αιτίες είναι οι εξής:
1. Ατελής ενζυματική πέψη δειγμάτων ιστού.
Σύσταση: Ο χρόνος επεξεργασίας του δείγματος της Foregene Protease μπορεί να παραταθεί κατάλληλα ή το υπερκείμενο μπορεί να ληφθεί μετά από φυγοκέντρηση στις 12.000 rpm (~13.400 × g) για 5 λεπτά.
2. Υπερβολική χρήση δειγμάτων ιστών ή μεγάλων ιστών.
Σύσταση: Καλό είναι να μην υπερβαίνετε το 1 στοματικό επίχρισμα στο δείγμα.εάν το δείγμα είναι πολύ μεγάλο, αυξήστε τη δόση του ρυθμιστικού διαλύματος ST1, της πρωτεάσης Foregene, του ρυθμιστικού διαλύματος ST2 ανάλογα.
3. Το ιξώδες του δείγματος είναι πολύ υψηλό.
Σύσταση: Τα δείγματα μπορούν να αραιωθούν κατάλληλα με 10 mM Tris-HCl πριν από την εκχύλιση του γονιδιωματικού DNA.
4. Θραύσματα της κάρτας αίματος έχουν πιπιλιστεί.
Σύσταση: Ο χρόνος παροδικής φυγοκέντρησης του βήματος 6 της γονιδιωματικής εκχύλισης κηλίδων αίματος (Κάρτα FTA) μπορεί να παραταθεί κατάλληλα.
Χαμηλή απόδοση ή καθόλου DNA
Υπάρχει συχνά μια ποικιλία παραγόντων που επηρεάζουν την απόδοση του γονιδιωματικού DNA, συμπεριλαμβανομένης της προέλευσης του δείγματος, των συνθηκών αποθήκευσης του δείγματος, της προετοιμασίας του δείγματος, του χειρισμού κ.λπ.
Το γονιδιωματικό DNA δεν μπορεί να ληφθεί κατά την εκχύλιση
Οι πιθανές αιτίες είναι οι εξής:
1. Η ακατάλληλη διατήρηση των δειγμάτων ή η αποθήκευση για πολύ μεγάλο χρονικό διάστημα οδηγεί σε αποικοδόμηση του γονιδιωματικού DNA.
Σύσταση: Τα στοματικά επιχρίσματα θα πρέπει κατά προτίμηση να λαμβάνονται πρόσφατα και δεν συνιστάται η χρήση συντηρημένων επιχρισμάτων για εργασίες εξαγωγής γονιδιωματικού DNA.Τα δείγματα κηλίδων αίματος πρέπει να διασφαλίζουν ότι η ποιότητα είναι κατάλληλη και ο χρόνος αποθήκευσης δεν πρέπει να είναι πολύ μεγάλος.
2. Η πολύ μικρή χρήση ιστού μπορεί να οδηγήσει σε μη εξαγωγή του αντίστοιχου γονιδιωματικού DNA.
Σύσταση: Ακολουθήστε τις οδηγίες δειγματοληψίας στοματικού επιχρίσματος στον οδηγό λειτουργίας και σκουπίστε όσο το δυνατόν περισσότερες φορές, ώστε να μπορούν να συνδεθούν αρκετά κύτταρα στο στοματικό στειλεό για την εξαγωγή γονιδιωματικού DNA.για την εξαγωγή δείγματος κηλίδων αίματος, η περιοχή κοπής κηλίδων αίματος μπορεί να αυξηθεί κατάλληλα.
3. Η Foregene Protease διατηρείται εσφαλμένα, με αποτέλεσμα τη μείωση της δραστηριότητάς της ή την αδρανοποίηση της.
Σύσταση: Επιβεβαιώστε τις συνθήκες αποθήκευσης της Foregene Protease ή αντικαταστήστε την με μια νέα Foregene Protease για ενζυματική αντίδραση.
4. Η ακατάλληλη συντήρηση του κιτ ή ο χρόνος αποθήκευσης είναι πολύ μεγάλος, με αποτέλεσμα την αστοχία ορισμένων εξαρτημάτων του κιτ.
Σύσταση: Αγοράστε ένα νέο κιτ απομόνωσης DNA στοματικού επιχρίσματος για σχετικές διαδικασίες.
5. Το ρυθμιστικό διάλυμα WB δεν προσθέτει απόλυτη αιθανόλη.
Σύσταση: Επιβεβαιώστε ότι το ρυθμιστικό διάλυμα WB προσθέτει τον σωστό όγκο απόλυτης αιθανόλης.
6. Το υγρό έκλουσης δεν προστίθεται σωστά στο φιλμ σιλικόνης.
Σύσταση: Προσθέστε 65 °C προθερμασμένες σταγόνες διαλύματος έκλουσης στη μέση της μεμβράνης σιλικόνης και αφήστε σε θερμοκρασία δωματίου για 5 λεπτά για να αυξήσετε την απόδοση έκλουσης.
Απομονώθηκε γονιδιωματικό DNA χαμηλής απόδοσης
Οι ακόλουθες πιθανές αιτίες είναι οι εξής:
1. Η ακατάλληλη διατήρηση των δειγμάτων ή η αποθήκευση για πολύ μεγάλο χρονικό διάστημα οδηγεί σε αποικοδόμηση του γονιδιωματικού DNA.
Σύσταση: Τα στοματικά επιχρίσματα κατά προτίμηση λαμβάνονται πρόσφατα και τα διατηρημένα επιχρίσματα δεν θα πρέπει να χρησιμοποιούνται για την εξαγωγή γονιδιωματικού DNA.
2. Εάν η ποσότητα του δείγματος ιστού είναι πολύ μικρή, η περιεκτικότητα του εξαγόμενου γονιδιωματικού DNA θα είναι μικρότερη.
Σύσταση: Ακολουθήστε τις οδηγίες δειγματοληψίας επιχρίσματος από το στόμα στον οδηγό λειτουργίας, σκουπίζοντας όσο το δυνατόν περισσότερες φορές, ώστε να μπορούν να συνδεθούν αρκετά κύτταρα στο στοματικό στειλεό για εξαγωγή γονιδιωματικού DNA.
3. Η Foregene Protease διατηρείται εσφαλμένα, με αποτέλεσμα τη μείωση της δραστηριότητάς της ή την αδρανοποίηση της.
Σύσταση: Επιβεβαιώστε τις συνθήκες αποθήκευσης της Foregene Protease ή αντικαταστήστε την με μια νέα Foregene Protease για ενζυματική αντίδραση.
4. Προβλήματα εκλούσεως.
Σύσταση: Χρησιμοποιήστε ρυθμιστικό διάλυμα EB για έκλουση.εάν χρησιμοποιείτε ddH2O ή άλλα διαλύματα έκλουσης, επιβεβαιώστε ότι το pH του εκλούσματος είναι μεταξύ 7,0-8,5.
5. Το έκλουσμα δεν προστίθεται σωστά στάγδην.
Σύσταση: Προσθέστε σταγόνες διαλύτη έκλουσης στη μέση της μεμβράνης σιλικόνης και αφήστε σε θερμοκρασία δωματίου για 5 λεπτά για να αυξήσετε την απόδοση έκλουσης.
6. Το υγρό έκλουσης συσσωρεύεται πολύ λίγο.
Σύσταση: Χρησιμοποιήστε υγρό έκλουσης για έκλουση γονιδιωματικού DNA όπως απαιτείται στις οδηγίες, τουλάχιστον όχι λιγότερο από 15 μl.
Χαμηλή καθαρότητα γονιδιωματικού DNA που απομονώθηκε
Η χαμηλή καθαρότητα του γονιδιωματικού DNA μπορεί να οδηγήσει σε αποτυχία ή μη ικανοποιητικά αποτελέσματα μεταγενέστερων πειραμάτων, όπως: τα ένζυμα δεν μπορούν να αποκοπούν, η PCR δεν μπορεί να πάρει το γονιδιακό θραύσμα που μας ενδιαφέρει κ.λπ.
Οι πιθανές αιτίες είναι οι εξής:
1. Ρύπανση από ετεροπρωτεΐνες, ρύπανση από RNA.
Ανάλυση: Η στήλη καθαρισμού δεν πλύθηκε χρησιμοποιώντας ρυθμιστικό PW.η στήλη καθαρισμού πλύσης ρυθμιστικού PW δεν πλύθηκε χρησιμοποιώντας τη σωστή φυγοκεντρική ταχύτητα.
Σύσταση: Βεβαιωθείτε ότι δεν υπάρχει καθίζηση στο υπερκείμενο πριν προσθέσετε αιθανόλη.φροντίστε να πλύνετε τη στήλη καθαρισμού σύμφωνα με τις οδηγίες και αυτό το βήμα δεν μπορεί να παραλειφθεί.
2. Ρύπανση από ακαθαρσίες ιόντων.
Ανάλυση: Η στήλη καθαρισμού πλύσης ρυθμιστικού διαλύματος WB παραλήφθηκε ή πλύθηκε μόνο μία φορά, με αποτέλεσμα την υπολειμματική ιοντική μόλυνση.
Σύσταση: Φροντίστε να πλύνετε το Buffer WB 2 φορές σύμφωνα με τις οδηγίες για να αφαιρέσετε τα υπολειμματικά ιόντα όσο το δυνατόν περισσότερο.
3. Μόλυνση από ένζυμα RNA.
Ανάλυση: Ξένες RNases προστέθηκαν στο ρυθμιστικό διάλυμα.Η λειτουργία πλύσης ρυθμιστικού PW ήταν εσφαλμένη, με αποτέλεσμα υπολείμματα RNase, που επηρεάζουν τις μεταγενέστερες πειραματικές λειτουργίες RNA, όπως η in vitro μεταγραφή.
Σύσταση: Τα κιτ απομόνωσης νουκλεϊκών οξέων της σειράς Foregene μπορούν να αφαιρέσουν το RNA χωρίς πρόσθετη προσθήκη RNase, επομένως το κιτ απομόνωσης DNA καρτών στοματικής μπατονέτας/FTA δεν χρειάζεται να προσθέσει RNase.φροντίστε να ακολουθήσετε τις οδηγίες για τη στήλη καθαρισμού πλύσης Buffer PW και αυτό το βήμα δεν μπορεί να παραλειφθεί.
4. Υπόλειμμα αιθανόλης.
Ανάλυση: Το ρυθμιστικό διάλυμα WB δεν πραγματοποίησε φυγοκέντρηση με κενό σωλήνα μετά την έκπλυση της στήλης καθαρισμού.
Σύσταση: Εκτελέστε τη σωστή λειτουργία φυγοκέντρησης με άδειο σωλήνα σύμφωνα με τις οδηγίες.
5. Άλλη ρύπανση από ακαθαρσίες.
Ανάλυση: Τα αποθηκευμένα δείγματα ή τα ειδικά δείγματα δεν υποβάλλονται σε προεπεξεργασία.
Σύσταση: Προεπεξεργαστείτε προσεκτικά το δείγμα σύμφωνα με τις οδηγίες.
