Οδηγοί για την ανάλυση προβλημάτων

The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。

Δεν μπορεί να εξαχθεί RNA ή η απόδοση νουκλεϊκού οξέος είναι χαμηλή

Υπάρχουν συνήθως πολλοί παράγοντες που επηρεάζουν την αποτελεσματικότητα ανάκτησης, όπως: η περιεκτικότητα σε δείγμα RNA, η μέθοδος λειτουργίας, ο όγκος έκλουσης κ.λπ..

Ανάλυση κοινών αιτιών:

1.Λουτρό πάγου ή φυγοκέντρηση σε χαμηλή θερμοκρασία (4 °C) κατά τη λειτουργία.

Πρόταση: Λειτουργία σε θερμοκρασία δωματίου (15-25 ° C), ποτέ παγόλουτρο και φυγόκεντρος χαμηλής θερμοκρασίας.

2. Ακατάλληλη αποθήκευση δείγματος ή αποθήκευση δειγμάτων για πολύ μεγάλο χρονικό διάστημα.

Πρόταση: Αποθηκεύστε τα δείγματα στους -80 ° C ή καταψύξτε σε υγρό άζωτο και αποφύγετε την επαναλαμβανόμενη χρήση κατάψυξης-απόψυξης.προσπαθήστε να χρησιμοποιήσετε πρόσφατα συλλεγμένα δείγματα για εξαγωγή RNA.

3. Ανεπαρκής λύση δείγματος

Σύσταση: Βεβαιωθείτε ότι το δείγμα και το διάλυμα εργασίας (Γραμμικό Ακρυλαμίδιο) έχουν αναμειχθεί καλά και επωάζονται για 10 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου (15-25 ° C)

4.Το εκλουστικό προστέθηκε λανθασμένα

Σύσταση: Βεβαιωθείτε ότι ddH2O Χωρίς RNase έχει προστεθεί στο μέσο της μεμβράνης της στήλης καθαρισμού

5. Ακατάλληλος όγκος άνυδρης αιθανόλης στο Buffer viRW2

Πρόταση: Ακολουθήστε τις οδηγίες, προσθέστε τον σωστό όγκο άνυδρης αιθανόλης στο Buffer viRW2 και ανακατέψτε τα καλά πριν χρησιμοποιήσετε το κιτ.

6.Ακατάλληλη χρήση δείγματος.

Πρόταση: 200µl δείγματος ανά 500μl ρυθμιστικού διαλύματος viRL.Ο υπερβολικός όγκος δείγματος θα έχει ως αποτέλεσμα μειωμένο ρυθμό εκχύλισης RNA.

7.Ακατάλληλος όγκος έκλουσης ή ατελής έκλουση.

Πρόταση: Ο όγκος του εκλούτη της στήλης καθαρισμού είναι 30-50μl.εάν το αποτέλεσμα έκλουσης δεν είναι ικανοποιητικό, συνιστάται η προσθήκη προθερμασμένου ddH χωρίς RNase₂O και παρατείνετε το χρόνο τοποθέτησης σε θερμοκρασία δωματίου, όπως 5-10 λεπτά

8. Η στήλη καθαρισμού έχει υπόλειμμα αιθανόλης μετά το ξέπλυμα σε Buffer viRW2.

Πρόταση: Εάν εξακολουθεί να παραμένει αιθανόλη μετά το ξέπλυμα στο Buffer viRW2 και τη φυγοκέντρηση σε κενό σωλήνα για 2 λεπτά, η στήλη καθαρισμού μπορεί να αφεθεί σε θερμοκρασία δωματίου για 5 λεπτά μετά τη φυγοκέντρηση σε κενό σωλήνα για να αφαιρεθεί πλήρως η υπόλοιπη αιθανόλη.

Η αποικοδόμηση των καθαρισμένων μορίων RNA

Η ποιότητα του καθαρισμένου RNA σχετίζεται με παράγοντες όπως η αποθήκευση δείγματος, η μόλυνση με RNase και η λειτουργία.

Ανάλυση κοινών αιτιών:

1.Τα δείγματα που συλλέχθηκαν δεν σώθηκαν εγκαίρως.

Πρόταση: Εάν το δείγμα δεν χρησιμοποιηθεί εγκαίρως μετά τη συλλογή, αποθηκεύστε το αμέσως στους -80 ℃ ή σε υγρό άζωτο.Για την εξαγωγή μορίων RNA, προσπαθήστε να χρησιμοποιείτε πρόσφατα συλλεγμένα δείγματα όποτε είναι δυνατόν.

2. Τα συλλεχθέντα δείγματα καταψύχθηκαν και αποψύχθηκαν επανειλημμένα.

Πρόταση: Αποφύγετε την επαναλαμβανόμενη κατάψυξη και απόψυξη (όχι περισσότερο από μία φορά) κατά τη συλλογή και αποθήκευση του δείγματος, διαφορετικά η απόδοση νουκλεϊκού οξέος θα μειωθεί.

3. Εισήχθη RNase στο χειρουργείο ή δεν φορέθηκαν γάντια μιας χρήσης, μάσκες κ.λπ.

Πρόταση: Το πείραμα εξαγωγής μορίων RNA γίνεται καλύτερα σε ξεχωριστή αίθουσα χειρουργείων RNA και ο πειραματικός πίνακας καθαρίζεται πριν από το πείραμα.Φοράτε γάντια και μάσκες μιας χρήσης κατά τη διάρκεια του πειράματος για να αποφύγετε την υποβάθμιση του RNA που προκαλείται από την εισαγωγή RNase.

4. Το αντιδραστήριο μολύνεται από RNase κατά τη χρήση.

Πρόταση: Αντικαταστήστε το με νέο κιτ απομόνωσης ιού RNA για σχετικά πειράματα.

5.Η μόλυνση με RNase των σωλήνων φυγοκέντρησης, των άκρων πιπέττων κ.λπ. Πρόταση: Βεβαιωθείτε ότι οι σωλήνες φυγοκέντρησης, τα άκρα της πιπέτας και οι πιπέτες δεν περιέχουν RNase.

Τα καθαρισμένα μόρια RNA επηρέασαν τα κατάντη πειράματα

Τα μόρια RNA που καθαρίζονται από τη στήλη καθαρισμού θα επηρεάσουν τα κατάντη πειράματα εάν υπάρχουν πάρα πολλά ιόντα άλατος ή πρωτεΐνες, όπως: αντίστροφη μεταγραφή, στύπωμα Northern, κ.λπ..

1.Υπάρχουν εναπομείναντα ιόντα άλατος στα εκλουόμενα μόρια RNA.

Σύσταση: Βεβαιωθείτε ότι έχει προστεθεί ο σωστός όγκος άνυδρης αιθανόλης στο Buffer viRW2 και πλύνετε τη στήλη καθαρισμού δύο φορές σύμφωνα με τη σωστή ταχύτητα φυγοκέντρησης στις οδηγίες λειτουργίας. Εάν υπάρχουν ακόμα ιόντα άλατος, μπορείτε να προσθέσετε το Buffer viRW2 στη στήλη καθαρισμού και να το αφήσετε σε θερμοκρασία δωματίου για 5 λεπτά.Στη συνέχεια, εκτελέστε φυγοκέντρηση για να αφαιρέσετε τη μόλυνση με ιόντα άλατος στο μέγιστο βαθμό

2.Υπάρχουν εναπομείνασα αιθανόλη στα εκλουόμενα μόρια RNA

Πρόταση: Μόλις επιβεβαιώσετε ότι οι στήλες καθαρισμού έχουν ξεπλυθεί με Buffer viRW2, εκτελέστε φυγοκέντρηση σε άδειο σωλήνα σύμφωνα με την ταχύτητα φυγοκέντρησης που αναγράφονται στις οδηγίες λειτουργίας.Εάν εξακολουθεί να υπάρχει αιθανόλη, μπορεί να αφεθεί για 5 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου μετά από φυγοκέντρηση σε άδειο σωλήνα για να αφαιρεθεί η υπόλοιπη αιθανόλη στο μέγιστο βαθμό.

Εγχειρίδια οδηγιών:

Εγχειρίδιο οδηγιών κιτ απομόνωσης ιού RNA