Η χαμηλή αναλογία A260/A230 προκαλείται συνήθως από ακαθαρσίες με μέγιστο μήκος κύματος απορρόφησης στα 230 nm.Ας δούμε τι περιλαμβάνουν αυτές οι ακαθαρσίες:

• Κοινοί ρύποι	Μήκος κύματος απορρόφησης	Επίδραση αναλογίας
  Πρωτεΐνη	~230nm και 280nm	Ταυτόχρονη μείωση του Α260/A 280και ένα260/A 280αναλογίες
  Αλάτι γουανιδίνης	220-240 nm	Μειώστε το Α260/A 280αναλογία
  Φαινόλη	~ 270 nm	-
  Τριζόλ	~230nm και 270nm	Μειώστε το Α260/A 280αναλογία
  EDTA	~ 230 nm	Μειώστε το Α260/A 280αναλογία
  Αιθανόλη	230-240 nm	Μειώστε το Α260/A 280αναλογία

 
 
 
Μήκος κύματος απορρόφησης και τιμή αντίθεσης κοινών ρύπων

Pμόλυνση από ροτεΐνη
Η πρωτεϊνική ρύπανση μπορεί να θεωρηθεί ως η πιο κοινή ρύπανση στη διαδικασία εκχύλισης νουκλεϊκού οξέος.Η πρωτεΐνη υπάρχει μεταξύ της ανώτερης και της κατώτερης υδατικής φάσηςοργανικόςφάση .Η ρύπανση θα μειώσει την αναλογία των A260/A280 και A260/A230 ταυτόχρονα, και η αναλογία A260/A230 θα αλλάξει πιο προφανώς από την αναλογία A260/A280.
Κατά τη διάρκεια των επόμενωναντίστροφη μεταγραφήor Αντιδράσεις qPCR, υπολείμματα πρωτεΐνης μπορεί να αναστείλουν ή να επηρεάσουν τη λειτουργία των ενζύμων.Ο καλύτερος τρόπος για να αποφευχθεί η μόλυνση από πρωτεΐνες είναι να έχετε κατά νου την αρχή «μάλλον λιγότερη παρά περισσότερη, μικρή ποσότητα πολλές φορές» κατά την αναρρόφηση του υπερκειμένου.

2. Ρύπανση από γουανιδίνιο
Το υδροχλωρίδιο (GuHCl) και η θειοκυανική γουανιδίνη (GTC) έχουν ως αποτέλεσμα τη μετουσίωση των πρωτεϊνών, οι οποίες μπορούν να καταστρέψουν γρήγορα τις κυτταρικές μεμβράνες κατά τη διαδικασία εκχύλισης νουκλεϊκού οξέος, προκαλώντας μετουσίωση και κατακρήμνιση πρωτεΐνης.Το μήκος κύματος απορρόφησης του GuHCl και του GTC είναι μεταξύ 220-240 nm και τοΤο υπολειμματικό άλας γουανιδινίου θα μειώσει την αναλογία Α260/Α230.Αν και το υπολειμματικό άλας γουανιδινίου θα μειώσει την αναλογία,ο αντίκτυπος στα κατάντη πειράματα είναι στην πραγματικότητα αμελητέος.

3. Μόλυνση από Trizol
Το κύριο συστατικό του Trizol είναι η φαινόλη.Η κύρια λειτουργία της φαινόλης είναι να λύει τα κύτταρα και να απελευθερώνει πρωτεΐνες και ουσίες νουκλεϊκών οξέων στα κύτταρα.Αν και η φαινόλη μπορεί να μετουσιώσει αποτελεσματικά τις πρωτεΐνες, δεν μπορεί να αναστείλει πλήρως τη δραστηριότητα της RNase.Επομένως, 8-υδροξυκινολίνη, ισοθειοκυανική γουανιδίνη, β-μερκαπτοαιθανόλη, κ.λπ. προστίθενται στο TRIzol για την αναστολή της ενδογενούς και εξωγενούς RNase.
Κατά την εξαγωγή κυτταρικού RNA, το Trizol μπορεί να λύσει γρήγορα τα κύτταρα και να αναστείλει τη νουκλεάση που απελευθερώνεται από τα κύτταρα και το υπολειμματικό Trizol θα μειώσει σημαντικά την αναλογία Α260/Α230.
Μέθοδος επεξεργασίας: Κατά τη φυγοκέντρηση, πρέπει να σημειωθεί ότι η φαινόλη στο Trizol είναι εύκολα διαλυτή στην υδατική φάση υπό συνθήκες 4° και θερμοκρασία δωματίου.

4. Κατάλοιπο αιθανόλης
Η αιθανόλη χρησιμοποιείται στην τελική διεργασία για την κατακρήμνιση του DNA ενώ διαλύει τα ιόντα άλατος που μπορεί να είναι συνδεδεμένα με το DNA.Το μήκος κύματος απορρόφησης του υψηλότερουκορυφή απορρόφησης τουη αιθανόλη είναι επίσης στα 230-240 nm, πουθα μειώσει επίσης την αναλογία A260/A230.
Η μέθοδος αποφυγής υπολειμμάτων αιθανόλης μπορεί να επαναληφθεί δύο φορές κατά την τελική έκλουση, φυσώντας στοκουκούλα καπνούγια δύο λεπτά για να αφήσει την αιθανόλη να εξατμιστεί πλήρως πριν προσθέσετε ρυθμιστικό διάλυμα για έκλουση.
Ωστόσο, πρέπει να είναι γνωστό ότι η αναλογία είναι μόνο ένας δείκτης αξιολόγησης της ποιότητας του RNA.Εάν οι προαναφερθείσες λειτουργίες ρυθμίζονται αυστηρά, η απόκλιση μεταξύ του λόγου και του τυπικού εύρους δεν θα έχει μεγάλο αντίκτυπο στα κατάντη πειράματα.
Σχετικά προϊόντα:
Κιτ απομόνωσης ολικού RNA ζώων
Κιτ απομόνωσης ολικού RNA φυτού
Κιτ απομόνωσης ολικού RNA κυττάρων
Plant Total RNA Isolation Kit Plus