Οδηγός ανάλυσης προβλημάτων

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

Χαμηλή απόδοση ή καθόλου DNA

Υπάρχουν συνήθως πολλοί παράγοντες που επηρεάζουν την απόδοση του γονιδιωματικού DNA, όπως η πηγή του δείγματος, η ηλικία του δείγματος, οι συνθήκες αποθήκευσης του δείγματος και η λειτουργία.

Δεν ήταν δυνατό να ληφθεί γονιδιωματικό DNA κατά την εκχύλιση

1. Τα δείγματα ιστού αποθηκεύονται ακατάλληλα ή αποθηκεύονται για μεγάλο χρονικό διάστημα, με αποτέλεσμα την αποικοδόμηση του γονιδιωματικού DNA.

Σύσταση: Αποθηκεύστε τα δείγματα ιστού σε υγρό άζωτο ή -20°ΝΤΟ;προσπαθήστε να χρησιμοποιήσετε δείγματα που συλλέχθηκαν πρόσφατα για εξαγωγή γονιδιωματικού DNA.

2. Πολύ μικρή ποσότητα δείγματος μπορεί να προκαλέσει τη μη εξαγωγή του αντίστοιχου γονιδιωματικού DNA.

Πρόταση: Για δείγματα ιστού που έχουν αποθηκευτεί για μεγάλο χρονικό διάστημα ή έχουν σοβαρή αποικοδόμηση του γονιδιωματικού DNA, η ποσότητα των δειγμάτων ιστού μπορεί να αυξηθεί κατάλληλα ώστε να εξαχθεί σημαντικό γονιδιωματικό DNA.Η ποσότητα του δείγματος μπορεί να προσδιοριστεί σύμφωνα με τις ανάγκες του DNA, αλλά το φρέσκο ​​δείγμα δεν πρέπει να υπερβαίνει τα 100 mg και το ξηρό δείγμα δεν πρέπει να υπερβαίνει τα 30 mg.

3. Το δείγμα δεν αλέθεται με υγρό άζωτο ούτε τοποθετείται για πολύ καιρό μετά από υγρό άζωτο.

Πρόταση: Κατά την εξαγωγή του DNA, το δείγμα πρέπει να αλεσθεί πλήρως με υγρό άζωτο για να σπάσει το κυτταρικό τοίχωμα.Μετά την άλεση, μεταφέρετε το δείγμα σκόνης σε PL1 προθερμασμένο στους 65°C°C το συντομότερο δυνατό (μόλις λιώσει η αλεσμένη σκόνη, το γονιδιωματικό DNA θα αρχίσει να αποικοδομείται γρήγορα) .

4. Η ακατάλληλη αποθήκευση της πρωτεάσης Foregene οδηγεί σε μειωμένη ή αδρανοποιημένη δραστηριότητα.

Σύσταση: Επιβεβαιώστε τις συνθήκες αποθήκευσης της Foregene Protease ή αντικαταστήστε την με μια νέα Foregene Protease για ενζυματική υδρόλυση.

5. Το κιτ δεν έχει αποθηκευτεί σωστά ή είναι αποθηκευμένο για μεγάλο χρονικό διάστημα, προκαλώντας βλάβη ορισμένων εξαρτημάτων του κιτ.

Σύσταση: Αγοράστε ένα νέο κιτ εξαγωγής γονιδιωματικού DNA φυτού για σχετικές εργασίες.

6. Λανθασμένη χρήση του κιτ.

Πρόταση: Αγοράστε ένα κιτ απομόνωσης φυτικού DNA αφιερωμένου σε δείγματα για εκχύλιση και καθαρισμό του γονιδιωματικού DNA των φυτών.

7. Απομονώστε το WB χωρίς προσθήκη αάνυδρη αιθανόλη.

Σύσταση: Βεβαιωθείτε ότι έχετε προσθέσει τον σωστό όγκο απόλυτης αιθανόλης στο Buffer WB.

8. Το υγρό έκλουσης δεν στάζει σωστά στη μεμβράνη πυριτίας.

Πρόταση: Προσθέστε το προθερμασμένο έκλουσμα στους 65°C℃στάγδην μέχρι το μέσο της μεμβράνης πυριτικής πηκτής και αφήστε το σε θερμοκρασία δωματίου για 5 λεπτά για να αυξήσετε την απόδοση έκλουσης.

Εκχύλιση για λήψη γονιδιωματικού DNA χαμηλής απόδοσης

1. Το δείγμα αποθηκεύεται ακατάλληλα ή αποθηκεύεται για μεγάλο χρονικό διάστημα, με αποτέλεσμα την αποικοδόμηση του γονιδιωματικού DNA.

Σύσταση: Αποθηκεύστε τα δείγματα ιστού στους -20℃;προσπαθήστε να χρησιμοποιήσετε δείγματα ιστού που έχουν συλλεχθεί πρόσφατα για την εξαγωγή γονιδιωματικού DNA.

2. Εάν η ποσότητα των δειγμάτων ιστού είναι πολύ μικρή, το εξαγόμενο γονιδιωματικό DNA θα είναι μικρότερο.

Πρόταση: Κάποια δείγματα φυτών είναι πλούσια σε νερό, όπως υδρόβια φυτά όπως φύκια κ.λπ., η δόση μπορεί να αυξηθεί κατάλληλα ή το νερό να αφυδατωθεί λίγο πριν την επέμβαση.

3. Τα δείγματα δεν αλέστηκαν καλά με υγρό άζωτο ή αφέθηκαν σε θερμοκρασία δωματίου για πολύ καιρό μετά την άλεση.

Πρόταση: Η λείανση υγρού αζώτου πρέπει να είναι επαρκής και το τοίχωμα του κυττάρου δείγματος πρέπει να σπάσει όσο το δυνατόν περισσότερο.αμέσως μετά την άλεση, το δείγμα σκόνης θα πρέπει να μεταφερθεί στο 65℃προθερμασμένο Buffer PL1 για το επόμενο βήμα.

4. Μη χρήση του σωστού κιτ.

Σύσταση: Χρησιμοποιήστε ένα αποκλειστικό κιτ απομόνωσης φυτικού DNA για την εξαγωγή και τον καθαρισμό του γονιδιωματικού DNA των φυτών.

5. Η ακατάλληλη αποθήκευση της πρωτεάσης Foregene οδηγεί σε μειωμένη ή αδρανοποιημένη δραστηριότητα.

Σύσταση: Επιβεβαιώστε τις συνθήκες αποθήκευσης της Foregene Protease ή αντικαταστήστε την με μια νέα Foregene Protease για ενζυματική υδρόλυση.

6. Πρόβλημα εκλούτη

Σύσταση: Χρησιμοποιήστε ρυθμιστικό διάλυμα EB για έκλουση.εάν χρησιμοποιείτε ddH₂O ή άλλα διαλύματα έκλουσης, βεβαιωθείτε ότι το pH του διαλύματος έκλουσης είναι μεταξύ 7,0-8,5.

7. Το υγρό έκλουσης δεν στάζει σωστά

Πρόταση: Προσθέστε τη σταγόνα έκλουσης στη μέση της μεμβράνης πυριτίου και αφήστε τη σε θερμοκρασία δωματίου για 5 λεπτά για να αυξήσετε την απόδοση έκλουσης.

8. Ο όγκος του εκλούσματος είναι πολύ μικρός

Πρόταση: Χρησιμοποιήστε το μέσο έκλουσης για έκλουση γονιδιωματικού DNA σύμφωνα με τις οδηγίες, τουλάχιστον τουλάχιστον 100μl.

Εξάγεται γονιδιωματικό DNA με χαμηλή καθαρότητα

Η χαμηλή καθαρότητα του γονιδιωματικού DNA θα οδηγήσει σε αποτυχία ή κακή επίδραση των κατάντη πειραμάτων, όπως: το ένζυμο δεν μπορεί να κοπεί και το θραύσμα γονιδίου στόχου δεν μπορεί να ληφθεί με PCR.

1. Διάφορη μόλυνση πρωτεϊνών, μόλυνση RNA.

Ανάλυση: Δεν χρησιμοποιήθηκε ρυθμιστικό διάλυμα PW για την πλύση της στήλης.Το ρυθμιστικό PW δεν χρησιμοποιήθηκε για την πλύση της στήλης με τη σωστή ταχύτητα φυγοκέντρησης.

Πρόταση: προσπαθήστε να διασφαλίσετε ότι δεν υπάρχει καθίζηση στο υπερκείμενο όταν το υπερκείμενο διέρχεται από τη στήλη.φροντίστε να πλύνετε τη στήλη καθαρισμού με Buffer PW σύμφωνα με τις οδηγίες και αυτό το βήμα δεν μπορεί να παραλειφθεί.

2. Ρύπανση από ακαθαρσίες ιόντων.

Ανάλυση: Η στήλη πλύσης ρυθμιστικού διαλύματος WB παραλήφθηκε ή πλύθηκε μόνο μία φορά, με αποτέλεσμα την υπολειμματική ιοντική μόλυνση.

Σύσταση: Φροντίστε να πλύνετε δύο φορές με Buffer WB σύμφωνα με τις οδηγίες για να αφαιρέσετε όσο το δυνατόν περισσότερο τα υπολειμματικά ιόντα.

3. Μόλυνση από RNase.

Ανάλυση: Εξωγενής RNase προστίθεται στο ρυθμιστικό διάλυμα.Η εσφαλμένη λειτουργία πλύσης στο Buffer PW θα έχει ως αποτέλεσμα την υπολειμματική RNase και θα επηρεάσει τις μεταγενέστερες πειραματικές λειτουργίες του RNA, όπως η in vitro μεταγραφή.

Πρόταση: Τα κιτ εκχύλισης νουκλεϊκών οξέων της σειράς Foregene μπορούν να αφαιρέσουν το RNA χωρίς επιπλέον RNase και όλα τα αντιδραστήρια στο κιτ απομόνωσης DNA φυτών δεν χρειάζονται RNase.φροντίστε να πλύνετε τη στήλη καθαρισμού με Buffer PW σύμφωνα με τις οδηγίες και αυτό το βήμα δεν μπορεί να παραλειφθεί.

4. Υπολείμματα αιθανόλης.

Ανάλυση: Μετά το πλύσιμο της στήλης καθαρισμού με ρυθμιστικό διάλυμα WB, δεν πραγματοποιήθηκε φυγοκέντρηση σε κενό σωλήνα.

Σύσταση: Ακολουθήστε τις οδηγίες για τη σωστή φυγοκέντρηση με άδειο σωλήνα.

Εγχειρίδιο οδηγιών:

Εγχειρίδιο οδηγιών Plant DNA Isolation Kit