Direct RT-qPCR Kit II
Περιγραφή κιτ:
◮Το Direct RT-qPCR Kit, χρησιμοποιώντας Foreasy Reverse Transcriptase και Foreasy HS Taq DNA Polymerase που αναπτύσσει η Foregene, με μοναδικό ρυθμιστικό διάλυμα αντίδρασης, κάνει αυτό το κιτ με ισχυρή αντίσταση και συμβατότητα και μπορεί να δοκιμάσει απευθείας την αντίδραση χρησιμοποιώντας το σύστημα Foregene Lysis ως πρότυπο.Αυτό το κιτ μπορεί να εφαρμοστεί για την ανάπτυξη κιτ ανίχνευσης νουκλεϊκού οξέος COVID-19 και άλλων παθογόνων βακτηρίων.
Περιγραφή
Το Direct RT-qPCR Kit παρέχει χωριστά συσκευασμένο ρυθμιστικό διάλυμα RT-qPCR, υψηλής απόδοσης Foreasy HS Taq DNA Polymeraseκαι Foreasy Reverse Transcriptase (MMLV),καθιστώντας το βολικό για τη δημιουργία κιτ back-end και προσαρμογή συστήματος, με απλή επαλήθευση.
Το Direct RT-qPCR Kit, χρησιμοποιώντας Foreasy Reverse Transcriptase και Foreasy HS Taq DNA Polymerase που αναπτύσσει η Foregene, με μοναδικό ρυθμιστικό διάλυμα αντίδρασης, κάνει αυτό το κιτ με ισχυρή αντίσταση και συμβατότητα και μπορεί να δοκιμάσει απευθείας την αντίδραση χρησιμοποιώντας το σύστημα Foregene Lysis ως πρότυπο.Αυτό το κιτ μπορεί να εφαρμοστεί για την ανάπτυξη κιτ ανίχνευσης νουκλεϊκού οξέος COVID-19 και άλλων παθογόνων βακτηρίων.
Αυτό το κιτ μπορεί να είναι άμεσα το συστατικό του προϊόντος IVD, χρησιμοποιώντας εύκολα και γρήγορα.Χρειάζεται μόνο εύκολη επαλήθευση, χωρίς να αναπτυχθεί ξανά.
Προδιαγραφές
500Τ, 50.000Τ
Εξαρτήματα κιτ
| Περιεχόμενα κιτ (20 μL σύστημα αντίδρασης) | IM-05111-02 | IM-05112-02 |
| 500 Τ | 50.000 Τ | |
| Foreasy Reverse Transcriptase (200 U/μL) | 50 μL×1 | 1 mL× 5 |
| Foreasy HS Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 100 μL×1 | 1 mL× 10 |
| 2× Απευθείας RT-qPCRΡυθμιστής | 1 mL × 5 | 500 mL × 1 |
| Εντολή | 1 | 1 |
Λειτουργικά Βήματα
Α: Προετοιμάστε το πρότυπο και το αντιδραστήριο
1. Προετοιμάστε προετοιμασμένο πρότυπο RNA (Συνιστάται η χρήση κιτ σειράς Foregene Total RNA Isolation Kit για την εξαγωγή και καθαρισμό του προτύπου RNA) ή δείγμα προϊόντος πυρόλυσης (Συνιστάται η χρήση του συστήματος Foregene Lysis), ειδικοί εκκινητές (10 μM) και άλλα σχετικά αναλώσιμα, όργανο.
2. Τοποθετήστε το 2× Direct RT-qPCR Buffer, RNase-Free ddH2O και 20× ROX Reference Dye (εάν χρειάζεται) στο κουτί με πάγο, κάνοντας τα να λιώσουν φυσικά και ανακατέψτε απαλά.
Β: Προετοιμάστε το σύστημα RT-qPCR
Λάβετε το μισό όγκο του ρυθμιστικού διαλύματος αντίδρασης του συστήματος αντίδρασης (για παράδειγμα, εάν ο όγκος του συστήματος είναι 20 μL, πρέπει να πάρει 10 μL 2× Άμεσο ρυθμιστικό διάλυμα RT-qPCR). Γιααντίστοιχη ποσότητα ενζύμου, το προτείνουμεM-MLV: Σύστημα αντίδρασης 10-30 U/20 μL,TaqDNA πολυμεράση:Σύστημα αντίδρασης 1-2 U/20 μLΑυτή είναι η πρότασή μας, θα πρέπει να τη δοκιμάσετε και να την προσαρμόσετε), προσθέστε πρότυπο RNA, ειδικούς εκκινητές και ανιχνευτές και προσθέστε ddH Χωρίς RNase2O έως 20 μL.Η ειδική προετοιμασία του συστήματος αντίδρασης RT-qPCR μπορεί να αναφέρεται στον ακόλουθο πίνακα 1.
Πίνακας 1: Προετοιμάστε το σύστημα RT-qPCR
| Συστατικό | Ενταση ΗΧΟΥ | Τελική συγκέντρωση |
| 2× Απευθείας ρυθμιστικό διάλυμα RT-qPCR | 10 μL | 1× |
| Foreasy Reverse Transcriptase (MMLV) | 10-30 U | |
| Foreasy HS Taq DNA Polymerase | 1-2 U | |
| Εμπρός αστάρι (10 μM) | 0,8 μL | 50-900 nM |
| Reverse Primer (10 μM) | 0,8 μL | 50-900 nM |
| Ανιχνευτής (4 μM) | 1 μL | 200nM |
| Πρότυπο (RNA ή προϊόν λύσης) | X μL | |
| 20× Βαφή αναφοράς ROX | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6,4-X) μL | |
| Συνολικός όγκος | 20 μL |
Σημείωση: Το Forward Primer και το Reverse Primer είναι ειδικοί εκκινητές του γονιδίου στόχου.Το σύστημα του qPCR θα μπορούσε να προσαρμοστεί σύμφωνα με πρακτικά πειραματικά μοντέλα και μοντέλα PCR.Συνιστούμε 400nM για την τελική συγκέντρωση των περισσότερων εκκινητών.Ρυθμίστε τον όγκο συγκεκριμένων εκκινητών και ανιχνευτών σύμφωνα με την προετοιμασμένη συγκέντρωση και τη συνιστώμενη τελική συγκέντρωση, παρακαλώ.
1*: Επιλέξτε την κατάλληλη τελική συγκέντρωση Βαφής Αναφοράς ROX σύμφωνα με διαφορετικά ποσοτικά όργανα PCR.Η βέλτιστη συγκέντρωση βαφής αναφοράς ROX των κοινών οργάνων ποσοτικής PCR φαίνεται στον παρακάτω πίνακα:
| Ποσοτικά όργανα PCR | Τελική συγκέντρωση Βαφής Αναφοράς ROX |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/Πρώτο βήμα,και τα λοιπά. | 1× (για παράδειγμα, προσθέστε 1μl 20×ROX Reference Dye σε σύστημα αντίδρασης 20 μL) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P και Mx4000, κ.λπ. | 0,5× (για παράδειγμα, προσθέστε 0,5μl 20×ROX Reference Dye σε σύστημα αντίδρασης 20 μL) |
| Όργανο Roche PCR, όργανο Bio-Rad PCR, όργανο ποσοτικής PCR Eppendorf κ.λπ. | Χωρίς βαφή αναφοράς ROX |
Αποθήκευση και διάρκεια ζωής
Το κιτ πρέπει να φυλάσσεται στους -20 ± 5℃.Πρέπει να φυλάσσεται αμέσως σε θερμοστατικό ψυγείο -20℃.Η περίοδος ισχύος είναι 2 έτη εάν αποθηκευτεί σε κατάλληλη κατάσταση.
